2014 Fiscal Year Research-status Report
ラット筋損傷モデルにおける炭酸ガス経皮吸収の効果についての検討
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25350814
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| Research Institution | Kobe University |
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Principal Investigator |
酒井 良忠 神戸大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (90397802)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 筋損傷 / 炭酸ガス / ミトコンドリア |
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| Outline of Annual Research Achievements |
・研究実績の概要
本研究の目的は、我々が現在まで科学的検討を行っているハイドロゲルを用いた炭酸ガス経皮吸収による炭酸ガス療法が、筋損傷の治癒過程を促進するかについて検討を行うものである。
今回われわれは、従来から多く行われているモデルである筋損傷モデル（ラットの右下脚に0.5%塩酸ビプバカインを注射）を用いた。設定群としては、0.5%塩酸ビプバカインを注射後、炭酸ガスを経皮膚吸収させる群と0.5%塩酸ビプバカイン/カルジオトキシンを両下腿へ注射後、処置を行わない群の2群で行うこととした。
炭酸ガスの投与方法は、週2日下腿全体へ20分間経皮吸収によって投与を行う。
各ラットは、2日後、7日後、28日後、42日後、56日後に各群3匹ずつ（計6匹ずつ、計12肢ずつ）安楽死させ、前脛骨筋を採取し、筋湿重量を測定する。その後、それぞれの筋は従来通り、凍結保存し、組織学的評価、分子生物学的評価（遺伝子レベル、タンパク質レベル）の解析を行う。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
2年間の実験期間中のラットの筋損傷モデルの目標サンプル数はすでに採取は終わっている。それらサンプルをH&E染色およびマッソントリクローム染色にて通常の筋損傷の治癒時期の確認、それから筋損傷モデルに炭酸ガスを経皮吸収させた場合の治癒時期の確認、結果炭酸ガスによって治癒期間が早まることは確認できている。さらに、Laminin&Dystrophin染色によって筋線維の基底膜・形質膜の修復時期の確認を行っている。また、リアルタイムPCRによる各々の時期のｍRNAの定量および蛍光免疫染色による筋合成系のタンパクの発現量の確認も行っている。
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| Strategy for Future Research Activity |
一昨年度からの実験に関しては、現状の計画通りに進めれば問題ないと考えている。これまでに採取したサンプルを一斉に組織学的、分子生物学的に評価を行い、筋損傷回復過程を早めた経路を確認しデータをまとめる予定である。
当初より本年度の計画として位置付けていた、筋損傷ラットモデルによる実験では、サンプルの採取はすでに終わり、筋損傷関連の遺伝子の増減についても定量が済んでいる。引き続き追加の蛍光免疫染色、ATPase染色等でそれらの組織学的検討を行っていく予定である。それから、筋損傷後14日目の評価も追加で必要と考えられるため、動物実験も行う予定である。
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| Causes of Carryover |
物品費の購入がやや遅れたこと、学会発表が１回のみであり、旅費の計上が少なかったことが上げられる。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
本年度も引き続き組織学的検討や、分子生物学的検討を行っていくため、RNAeasy、High capacityキット、Syber Green、各免疫染色液、実験に関する消耗品の購入のためのどう資金を必要とする。また、追加の動物実験も行う可能性がある。本年度は実験成果採取の年であり、本実験のデータを本年度のOrthopaedic Research Society（ORS）への発表しており、また本年度の日本整形外科学会基礎学術集会やその他の学会への発表も準備している。また国内外学会への成果発表旅費や論文発表後の印刷費なども計上している。
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