2015 Fiscal Year Annual Research Report
新規一分子計測のためのガラス基板の作製とDNA結合蛋白質研究への応用
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25440008
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
韓 龍雲 京都大学, 物質－細胞統合システム拠点, 助教 (50566297)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 蛍光１分子イメージング / DNA結合タンパク質 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
DNA相同組換え中間体であるHolliday構造DNAの分岐点移動反応に関与する大腸菌RuvA-RuvB蛋白質複合体やエピジェネティクス制御の中でメチル化DNA維持機構に関与するヘミメチルCpG結合蛋白質であるヒトUHRF1の機能解析を蛍光１分子イメージング技術を用いて解析を行っています。RuvA-RuvBについてはRuvBの６量体リング構造を二本鎖DNA上で形成する過程を明らかにできるような、UHRF1についてはヘミメチルCpGの探索過程を明らかにできるような研究を行っています。また、本研究で対象とする蛋白質のDNAやその他生体分子に対する解離定数が数百nMから数十μMと非常に高く、従来の全反射照明のような蛍光１分子イメージングでは解析が非常に困難でした。本研究では解離定数の非常に高いサンプルでも蛍光１分子イメージングを可能とするナノ開口基板を自らの手で作製し、作製したナノ開口基板を用いて、研究を行いました。
今年度は特にRuvB蛋白質に関して、様々な結果が得られました。RuvA-Holliday構造DNA複合体とのRuvBの複合体形成において、RuvBはADPやATPγS存在下で効率よく複合体形成を行うことが観察され、特にADPとATPγSの両者が存在すると更に多くのRuvBがRuvA-Holliday構造DNA複合体と相互作用することが確認されました。また、生化学的解析からRuvA-RuvBによるHolliday構造DNAの分岐点移動反応のKineticsを解析しました。以上の結果よりATPの加水分解によりRuvA-RuvB-Holliday構造DNA複合体形成が促進されることが示唆される考えられ、これまでの研究結果を雑誌論文に発表いたました。
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[Journal Article] ECHO-liveFISH: in vivo RNA labeling reveals dynamic regulation of nuclear RNA foci in living tissues2015
Author(s)
Ikumi Oomoto, Asuka Suzuki-Hirano, Hiroki Umeshima, Yong-Woon Han, Hiroyuki Yanagisawa, Peter Carlton, Yoshie Harada, Mineko Kengaku, Akimitsu Okamoto, Tomomi Shimogori, Dan Ohtan Wang
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Journal Title
Nucleic Acids Research
Volume: 43
Pages: e126
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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