2014 Fiscal Year Research-status Report
ゴルジ体に局在する５回膜貫通蛋白質群YIPFの機能解明
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25440092
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| Research Institution | Kyoto Sangyo University |
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Principal Investigator |
中村 暢宏 京都産業大学, 総合生命科学部, 教授 (50294955)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | ゴルジ体 / 幕貫通タンパク質 / ERAD / リソソーム |
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| Outline of Annual Research Achievements |
HeLa細胞にYIPF1, YIPF2とYIP6を外来性に発現させたところ，YIP1とYIP2は50%以上の細胞で高効率に発現したが，YIP6は10%以下の細胞で低効率でしか発現しなかった。そこで，YIPF6がERADあるいはリソソームで分解されているかどうかを，阻害剤を用いた実験で確認した。YIPF6をトランスフェクションした細胞をエポキソマイシン処理，あるいはバフィロマイシンA1処理したところ，いずれの処理でもYIPF6の量が増加した。したがって，過剰発現したYIPF6はERADで分解されるとともに，一部はリソソームに輸送されて分解されることが明らかとなった。YIPF1についても同様に，両試薬それぞれでYIPF1の増加が観察され，過剰発現したYIPF1はERADで分解されるとともに，一部はリソソームに輸送されて分解されることが明らかとなった。しかしながら，YIPF2については，いずれの試薬でもタンパク質量の増加が見られなかったため，YIPF1，YIPF6と異なり安定であることが示唆された。一方，内在性のYIPF1, YIPF2, YIPF6の量は，どちらの試薬によっても変化しなかった。したがって，内在性のYIPF1, YIPF2, YIPF6は安定であり，ERADやリソソームでの分解を受けていないことが明らかとなった。以上の結果から，YIPF6の発現量が低い理由として，ERADやリソソームでの分解が寄与していることが示唆されたものの，YIPF1も同様の調節を受けているにもかかわらず，YIPF1の発現量が高いことから，YIPF6は主として合成レベルでの調節を受けていることが示唆された。YIPF6もYIPF1も同じベクターにより同じプロモーター下で発現させているため，タンパク質翻訳レベルでの差がある可能性が考えられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
YIPF1, YIPF2, YIPF6の生化学的解析が進展して，論文に取りまとめ中である。機能解析の側面では，はっきりした表現系が得られず多少苦戦しているが，今年度中に研究目的が達成できる見通しである。
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| Strategy for Future Research Activity |
分極細胞，ムチン産生細胞を用いて，YIPFの機能解析を重点的に行う。
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| Causes of Carryover |
研究計画変更にともない，サーマルサイクラー（TC）の購入を今年度に延期していたが，今年度も必要度が高くならなかったため購入を見送った。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
研究の進捗状況によっては，来年度にTCを購入することもありうるが，現在の計画では，電子顕微鏡解析の委託等の実験が多く予想されるため，計画を変更して上記金額を来年度に繰り越し，上記の計画にて使用したい。
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[Journal Article] GM130 is a parallel tetramer in a flexible rod-like structure with N-terminally open (Y-shaped) and closed (I-shaped) conformations.2015
Author(s)
shida, R., Yamamoto, A., Nakayama, K., Sohda, M., Misumi, Y., Yasunaga, T. and Nakamura, N.
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Journal Title
FEBS Journal
Volume: 印刷中
Pages: 印刷中
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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