2013 Fiscal Year Research-status Report
Nanog遺伝子を持たないツメガエル細胞におけるリプログラミングの研究
Project/Area Number |
25440120
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Research Institution | National Institute of Advanced Industrial Science and Technology |
Principal Investigator |
小沼 泰子 独立行政法人産業技術総合研究所, 幹細胞工学研究センター, 主任研究員 (90431824)
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Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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Keywords | 幹細胞 / ツメガエル / リプログラミング / 多能性 |
Research Abstract |
多能性幹細胞の成立に必要なシグナルネットワークを進化的な観点から理解するために、多能性維持に重要な役割を果たしているNanog遺伝子がゲノムから失われているツメガエルを用いて研究を行った。平成25年度は、多能性幹細胞の樹立に必要なリプログラミング因子であるSox2, Oct3/4, Klf4, c-Myc等の導入に用いる培養細胞の作製を行った。初期ツメガエル胚から、組織片の切り出しまたは細胞解離を行い、それらをゼラチンコートしたデッシュ上で接着培養した。細菌等のコンタミネーション予防のために数種の抗生物質の効果を試した。その結果、Modified L-15 Medium Containing 10% Fatal Calf Serum(Methods in Cell Biology: Xenopus Laevis, Practical Uses in Cell and Molecular Biology, Vol. 36, 1991)を元に、改変を加えた培地を使用することで、コンタミネーションリスクをコントロールできた。この培地を用いて、継代を繰り返すことで、組織片培養から4株、全胚解離培養から2株のツメガエル培養細胞株を得た。これらの細胞の凍結保存方法について保存液や温度等の条件検討を行い、生存可能な凍結・融解方法を決定した。また、リプログラミング因子の導入に用いるウイルスベクターについても検討を行った。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
卵生の水生動物胚からの細胞培養においてコンタミネーションリスクをコントロールし、初代培養および複数の細胞株の樹立を達成した。多能性幹細胞の樹立に必要なツメガエル細胞株ができたことで、リプログラミング因子の導入が可能となった。
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Strategy for Future Research Activity |
樹立した細胞株を用いてリプログラミング因子導入を行い、遺伝子導入後のリプログラミング状態の確認を行う。
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Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
ツメガエル細胞へのリプログラミング因子の導入および、遺伝子導入後のリプログラミング状態の確認が平成25年度にできなかったため。 平成26年度にツメガエル細胞へのリプログラミング因子の導入および、遺伝子導入後のリプログラミング状態の確認を行い、必要な試薬・消耗品等の購入に使用する。
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