2013 Fiscal Year Research-status Report
新しいサンプル抽出法を用いた新規生理活性ペプチドの同定と生理機能解明
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25440171
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
岩越 栄子 広島大学, 総合科学研究科, 研究員 (50311296)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 生理活性ペプチド / 鳥類 |
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| Research Abstract |
本年度は、研究代表者らが独自の研究により開発した新しいサンプル抽出法を用いて、鳥類ニワトリから新規生理活性ペプチドを効率よく同定するために必要な条件検討を行った。
本新規サンプル抽出法は、ある有機溶媒を用いて抽出を行うことが特徴であるため、抽出溶液には、ペプチド性物質の他に多くの疎水性物質が含まれると推測される。生理活性ペプチドを効率よく同定するためには、純化の早い段階で、どれだけ不純物を除去できるかが重要なポイントとなる。加えて、本抽出法により得られる新規生理活性ペプチドは、疎水性が高く、長鎖であると予測しているため、高速液体クロマトグラフィー（HPLC）を用いた純化の過程において、従来どおりのカラムや溶媒では溶出されない、もしくは析出してしまうという問題が生じる可能性が高い。
まず、ニワトリ雛100個体の脳と消化管を用いて、条件検討を行った。その結果、脳の抽出液からは、HPLC第3段階精製を経て、コレシストキニン（CCK8）を同定することができた。CCK8は、疎水性が高い神経ペプチドとして既に多くの知見が存在する物質である。この結果により、新規サンプル抽出法で疎水性の高いペプチドを同定できる可能性が強く示唆された。
次に、食道から直腸までのすべてを消化管として抽出したが、抽出段階から純化の各過程において析出が生じ、精製が進んだ活性画分もあったが、結局、構造決定には至らなかった。
以上の予備実験の結果から、新規サンプル抽出法により効率的に新規ペプチドを同定するには、出発組織を細分化し、抽出後に脱脂を行い、疎水性物質の精製に向いているHPLCカラムを用いることが重要であることがわかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
計画当初、現在行っている構造決定の分析能力から、ニワトリ雛100個体を出発材料に用いれば、新規生理活性ペプチドを１つなりでも同定できると予想していた。しかしながら、得られた抽出液に含まれる物質は、予想以上に疎水性が高く、あらゆる純化の過程において問題を生じさせた。そこで平成25年度は、新しいサンプル抽出法を用いて、鳥類ニワトリから新規生理活性ペプチドを効率よく同定するために必要な条件検討を行うことにした。以上の観点から、「現在までの達成度」は、「やや遅れている」と評価した。
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| Strategy for Future Research Activity |
本年度は、新しいサンプル抽出法における問題点を洗い出し、改善するための実験を綿密に行った。その結果、いくつもの改善点を見出すことができた。これにより、当初の目的であった「新規生理活性ペプチドの同定」がスムーズに行えると考えている。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
本年度は、申請課題についての条件検討を行ったため、計画していた物品を購入しなかった。
実験の条件が固まったことで、計画どおり物品を購入する予定である。加えて、積極的に情報収集または成果報告をするために学会に参加する。
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[Journal Article] Identification of a cDNA encoding a novel small secretory protein, neurosecretory protein GL, in the chicken hypothalamic infundibulum.2014
Author(s)
Ukena K, Iwakoshi-Ukena E, Taniuchi S, Bessho Y, Maejima S, Masuda K, Shikano K, Kondo K, Furumitsu M, Tachibana T.
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Journal Title
Biochem. Biophys. Res. Commun.
Volume: 446
Pages: 298-303
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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