2014 Fiscal Year Research-status Report
| Project/Area Number |
25450133
|
|---|
| Research Institution | Nagasaki University |
|---|
Principal Investigator |
郷田 秀一郎 長崎大学, 工学研究科, 准教授 (00346587)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
|
| Keywords | 孔形成毒素 / プレポア |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
細胞膜を認識し、結合、多量体化することによって細胞を破壊するタンパク質は、膜孔形成毒素(Pore forming toxin; PFT)として、広く知られている。それらの中には黄色ブドウ球菌由来ロイコシジン等、人体に大きく悪影響を与えるものも知られている。本研究では、PFTの一つであり、ナマコの一種であるグミ由来溶血性レクチンCEL-IIIを用いて膜孔形成時の構造変化の解明の研究を行っている。申請者の所属する研究室ではCEL-IIIの通常の溶液状態での単量体での立体構造と膜孔形成時の多量体構造をX線結晶構造解析によって明らかとしている。しかしながら、本タンパク質を含めて多くのPFTの膜孔形成多量体の構造は報告されているが、構造変化に関しては不明であり、それを明らかにすることは重要である。近年、PFTの膜孔形成は中間体であるプレポア構造の形成を経て、完全な膜孔を形成すると報告されている。そこで、本年度はCEL-IIIの膜貫通部位に変異を導入することによってプレポア構造の解明を試みた。まず始めにCEL-IIIのドメイン間の相互作用が溶血活性に与える影響を解明するため、同部位への変異導入の影響を解析した。変異の導入は、プライマーを用いたPCRによって行い、変異体の作成に成功した。変異体は大腸菌を宿主に用いた組換えタンパク質として生産した。得られたタンパク質を用いた赤血球溶血活性測定の結果、変異の導入により溶血活性が大きく影響されることが明らかとなった。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
これまで、膜貫通部位と糖認識部位間の相互作用に関係する部位への変異導入を行っている。それらの結果により、異なる部位への変異導入による溶血活性の変化を測定し、会席している。26年度は膜貫通部位への変異体を作成することによる溶血活性と構造変化の関係を明らかにすることを目的に研究を行った。膜貫通部位への変異の導入に関しても、溶血活性に与える影響について各部位ごとに解析を行っている。これらのことによって、プレポア構造を解明する変異体の作成へと着実に進展している。現時点で、安定して変異体を作成し、溶血活性の測定を行うことができていることから、おおむね順調であると考えられた。
|
| Strategy for Future Research Activity |
膜貫通部位内でも、異なる部位では溶血活性に対する影響が異なることから、これらを解析し、プレポア構造解明に必要な変異導入部位の解析を行い、変異体の作成を行う。それらの変異体タンパク質を生産、精製し、膜孔形成中間体構造を明らかとしていく。
|
| Causes of Carryover |
予定よりも物品費を節約することができたため。
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度の消耗品の購入に充てる。
|
