2015 Fiscal Year Annual Research Report
カバノアナタケ菌に感染したシラカンバ幼植物体に生成する特異的タンパク質の画像解析
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25450204
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| Research Institution | Utsunomiya University |
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Principal Investigator |
横田 信三 宇都宮大学, 農学部, 教授 (60210613)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
上高原 浩 京都大学, (連合)農学研究科(研究院), 准教授 (10293911)
吉永 新 京都大学, (連合)農学研究科(研究院), 准教授 (60273489)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | シラカンバ / カバノアナタケ / ペルオキシダーゼ / MALDI/TOF/MSイメージング / 樹病 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度の研究においては、昨年度に引き続き、癌腫病菌カバノアナタケIO-U1株に感染した、3ヶ月生シラカンバ幼植物体No.8に発現する、菌感染特異的ペルオキシダーゼの組織内分布を、マトリックス支援レーザー脱離イオン化・飛行時間型質量分析法 (MALDI/TOF/MS) イメージング解析法を用いて検討した。3ヶ月生のシラカンバ幼植物体を調製し、主茎に傷を付け、そこにカバノアナタケIO-U1株の菌糸体を接種した。また、対照として、無傷・無菌及び有傷の植物体も、それぞれ用意した。各処理後、植物体を更に2、10、30日間培養した。各期間培養した植物体を収集し、処理部を採取した。各試料を急速凍結し、横断面切片を作成した。得られた切片を用いて、菌感染特異的ペルオキシダーゼのMALDI/TOF/MSにより得られたマススペクトルピークを基に、MALDI/TOF/MSイメージング解析を行った。今回は、別のタイプのマトリックスを使用した。イメージング解析の結果、菌感染特異的ペルオキシダーゼに由来すると思われるシグナルは2、10、30日間培養した植物体の横断面切片において、木部全体に観察された。しかし、組織化学的染色によって観察された、シグナルの局在は観察されなかった。
本年度の研究においては、イメージング解析の対象となる別のタンパク質を探索するために、菌感染特異的タンパク質の同定を行った。菌接種後2日目の植物体を収集し、急速凍結後、タンパク質を抽出した。サンプルを二次元電気泳動にかけ、CBBで染色後、画像解析により、12個の菌感染特異的タンパク質を検出した。これらのタンパク質を単離し、消化後、液体クロマトグラフィー・タンデム質量分析法により分析した。データベース検索により、これら12個のタンパク質を同定した。
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[Book] Plant Proteomics2015
Author(s)
Hiromu Suzuki, Yuya Takashima, Futoshi Ishiguri, Nobuo Yoshizawa, Shinso Yokota
Total Pages
227
Publisher
MDPI
