2015 Fiscal Year Annual Research Report
魚類エドワジエラ症原因菌による宿主免疫回避の分子機構─細胞生物学的アプローチ─
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25450304
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
長富 潔 長崎大学, 水産・環境科学総合研究科(水産), 教授 (40253702)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
原 研治 長崎大学, 水産・環境科学総合研究科(水産), 教授 (10039737) [Withdrawn]
金井 欣也 長崎大学, 水産・環境科学総合研究科(水産), 教授 (40145222)
小田 達也 長崎大学, 水産・環境科学総合研究科(水産), 教授 (60145307)
吉田 朝美 長崎大学, 水産・環境科学総合研究科(水産), 准教授 (80589870)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | flagellin / 抗酸化酵素 / プロモーター / 魚病細菌 / 酸化ストレス / 細胞培養系 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では主にマクロファージの細胞培養系で細胞生物学的手法を用いて、エドワジエラ症の原因菌Edwardsiella tarda (E.tarda) 強毒株flagellinによるマクロファージの免疫応答、抗酸化酵素の転写制御機構の解析、並びに細胞内シグナル伝達経路を明らかにすること、次いで、分子生物学的手法を用い、網羅的プロテオーム解析により未知の病原性関連因子を探索することを目的とした。
最終年度は、E.tarda強毒株組換えflagellin、並びにE.tarda強毒株及び弱毒株より調製した菌体外産生物質(ECP)をマウスマクロファージ系細胞RAW264.7に暴露したところ、弱毒株由来ECPにおいてのみ抗酸化酵素の１つであるCu,Zn-SOD mRNAの顕著な上昇が確認された。これらの結果はE.tarda強毒株由来flagellin及び強毒株由来ECPがCu,Zn-SODの誘導発現を抑制する可能性を示唆している。
一方、ルシフェラーゼアッセイ系によるプロモーター領域の解析では、ヒラメCu,Zn-SOD遺伝子5’-上流領域(－1,124 / －1)がプロモーターとして機能し、E.tarda強毒株及び弱毒株由来ECPの刺激に対して強い応答を示した。更に、種々の欠失ミュータントを用いて本酵素遺伝子の転写調節部位の特定を試みた結果、NF-IL6の認識配列(－202/ －194)を欠失させると、転写活性が有意に減少した。従って、NF-IL6の認識配列が酸化ストレス下における本酵素遺伝子の発現調節部位と推定した。
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