2013 Fiscal Year Research-status Report
海洋生物からの新規キチナーゼの検索・機能解析および応用技術開発
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25450309
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Nihon University |
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Principal Investigator |
松宮 政弘 日本大学, 生物資源科学部, 教授 (60150702)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | キチナーゼ / 精製 / 機能解析 / cDNAクローニング / 魚類 / 胃 / 軟体動物 / 甲殻類 |
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| Research Abstract |
1. 硬骨魚類胃キチナーゼの精製・性質・機能解析およびcDNAクローニング： イサキ胃より50kDaおよび60kDaのキチナーゼを精製し、その性質、機能解析を実施した。またそれぞれの遺伝子PtChi-1、PtChi-2を取得した。両キチナーゼは酸性域で良く作用し、基質特異性は両者で異なる事を明らかにした。カサゴ胃46kDa, 52kDa, 56kDaキチナーゼをコードする遺伝子SmChi-1、SmChi-2を取得した。
２．軟体動物マダコ唾液腺キチナーゼの精製・性質・機能解析および部分アミノ酸配列解析： マダコ唾液腺より各種クロマトグラフィーを用いて56kDaキチナーゼを精製し、その性質・機能解析および部分アミノ酸配列解析を実施した。最適pHは4.5、最適温度は40℃で、キチンナノファイバーを良く分解した。N-末端アミノ酸配列およびキチンオリゴ糖分解様式より、family-18エンド型キチナーゼに属すると考えられた。
３．甲殻類キチナーゼ遺伝子の分子クローニング：ガザミ肝膵臓より３種のキチナーゼcDNA断片（PotChi-1, PotChi-2, PotChi-3）が得られそれらは既報の甲殻類キチナーゼの配列と85-94%の相同性を示すことを明かにした。
４．軟骨魚類ヨシキリザメ胃キチナーゼのcDNAクローニング：ヨシキリザメ胃よりRT-PCRおよびRACE法を用いて約1,100 bpのcDNAを得た。演繹アミノ酸配列はアイナメ胃キチナーゼHoChi-1 (AB626093)と70%の相同性を示した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
1. 平成２５年度実験計画の「２．軟体動物マダコ、ミズダコ唾液腺キチナーゼの精製・性質・機能解析および部分アミノ酸配列解析」についてはマダコを用いて予定通りに進行させた。
2. 平成２５年度実験計画の「１．軟骨魚類ヨシキリザメ、マカスベ胃キチナーゼの精製・性質・機能解析および部分アミノ酸配列解析」 については試料の入手困難およびHPLCの故障のため、平成２６年度予定のcDNAクローニングを先行させ、ヨシキリザメ胃よりRT-PCRおよびRACE法を用いて約1,100 bpのcDNAを得ることが出来た。
3. 平成２５年度実験計画の「３．硬骨魚類マサバ、アイナメおよびシログチ胃１型酸性キチナーゼ（AFCase-1）および２型酸性キチナーゼ（AFCase-2）全長cDNAを用いた大腸菌による発現系構築および改良」については発表する段階までには進展していないが、進行中である。そこで、平成２７年度予定の甲殻類キチナーゼ遺伝子の分子クローニングに着手し、ガザミ肝膵臓より３種のキチナーゼcDNA断片（PotChi-1, PotChi-2, PotChi-3）を得た。
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| Strategy for Future Research Activity |
1.発現系の構築および発現条件の改良の担当者を増員し、研究を推進させる予定である。
2.他種生物キチナーゼのcDNAが得られ出したことより、キチナーゼの系統樹解析（特に脊椎動物）にも力を注ぐ予定である。
3.発現についてはαキチン（自然界に最も豊富に存在するキチン）分解能の高いキチナーゼ遺伝子を優先して進行させる予定である。
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Research Products
(10 results)
