2015 Fiscal Year Annual Research Report
視床下部視索上核ニューロンの浸透圧感知に関わる分子実体の解析
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25450464
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| Research Institution | Tottori University |
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Principal Investigator |
澁谷 泉 鳥取大学, 農学部, 教授 (50162649)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
北村 直樹 鳥取大学, 農学部, 准教授 (80301951)
浅野 淳 鹿児島大学, 獣医学部, 教授 (90312404)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | TRPV1 / 体液浸透圧 / バゾプレシン / 視索上核 / パッチクランプ / 細胞内Ca2+濃度 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
前年度までの研究成果により、ラット視索上核（SON）ニューロンにはTPRV1様イオンチャネルが存在し浸透圧感知に関与すること、しかしながら、そのSONニューロンの浸透圧感知分子の挙動はこれまで報告されているTRPV1分子の性質とは一致しないことが明らかとなった。加えてSONからTPRV1のN端を欠く新規スプライスバリアントを見いだし、TRPV1_SONと命名した。本年度は、中枢性浸透圧感知分子の実体を解明する目的で、TRPV1全長分子ならびに、TRPV1_SONをHEK293細胞に発現させ、細胞内Ca2+濃度ならびに、電気生理学的な解析を行った。その結果、
１．TRPV1全長分子を発現させたHEK293細胞は、Capsaicin、低pH、40度以上の高温に対してCa2+濃度の上昇を引き起こしただけでなく、50mMマニトール不可による浸透圧増加に対してもCa2+濃度上昇の反応を示した。また、これらの刺激で、膜電位固定下で内向き電流が観察された。 ２．TRPV1発現細胞で観察された浸透圧上昇による反応は、選択的TRPV1阻害剤であるCapsazepineによって可逆的に消失した。 ３．TRPV1_SONを発現させたHEK293細胞では、Capsaicin、低pH、40度以上の高温、50mMマニトール不可による浸透圧増加のいずれの刺激に対しても細胞内Ca2+濃度、イオン電流のいずれも変化しなかった。 ４．TRPV1発現細胞、TRPV1_SON発現細胞の両者から採取したサンプルで、TRPV1分子に対する抗体を用いてWestern blotを行ったところ、明瞭な信号が検出された。さらに、これら2種の細胞をビオチン化してから細胞を破砕した後に、アビジンカラムで回収したサンプルを用いたWestern blotでも同様の結果が得られた。
以上の結果から、TRPV1分子単独（ホモヘテロマー）で浸透圧感知が可能であること、TRPV1_SONはおそらくは単独で細胞膜に発現しうるが、浸透圧感知分子あるいはCapsaicin受容体としての性質は示さないことが明らかとなった。
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