2015 Fiscal Year Annual Research Report
カイコの胚子活性化時におけるミトコンドリアCa2+依存性溶質輸送体の役割
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25450489
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| Research Institution | Nihon University |
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Principal Investigator |
澤田 博司 日本大学, 文理学部, 教授 (60196326)
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2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | カイコガ / 休眠 / 浸酸処理 / カルシウム / 休眠移行阻害 / DMSO処理 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は，昨年度に引き続きクローニングしたカイコのミトコンドリアCa2+依存性溶質輸送体タンパク質（Bm-MSLC）をコードするcDNAの構造解析を行った。その結果，ORFは667アミノ酸をコードしており，分子内にCa2+の結合領域であるEF-ハンドモチーフが確認された。また，ミトコンドリア溶質輸送体タンパク質のスーパーファミリーに属するタンパク質に共通に確認されるモチーフとして「signature motif」が分子内に3カ所に確認された。
Bm-MSLCの特異的プライマーを調製し，遺伝子発現の変動を，塩酸処理休眠卵から抽出したmRNAを用いてRT―PCRにて詳細に解析を行った。その結果，塩酸処理を行っていないコントロールでは発現が認められなかったが，塩酸処理卵で，処理直後から48時間目までの調べた全てにおいて発現が確認された事から，塩酸処理の刺激により比較的短時間でBm-MSLC遺伝子の発現が誘導される事が示唆された。
また，Bm-MSLCの機能解析の一環として，リコンビナントBm-MSLC（rBm-MSLC）の発現と精製も試みた。その結果，精製したrBm-MSLCのSDS-PAGE上での分子量がおよそ74000 Daであり，N末端に付加しているヒスチジンタグの分子量を考慮すると，アミノ酸配列から予想した分子量とほぼ一致した。この精製したrBm-MSLCを用いてポリクローナル抗体を作成したところ，抗原を認識する特異的抗体が作成できた事を確認した。現在，この特異抗体を用いた免疫組織化学の準備を進めている。
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Research Products
(4 results)
