2014 Fiscal Year Research-status Report
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25450498
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| Research Institution | Shinshu University |
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Principal Investigator |
野崎 功一 信州大学, 学術研究院工学系, 准教授 (10313834)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | Swollenin / セルロース分解 / セルラーゼ / バイオマス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1. Swolleninの局在部位の特定
① Swolleninペプチド抗体の作製と反応性ーSwolleninに特異的なアミノ酸配列から抗原となる配列を決定し，ペプチド抗体を作製した。T. reeseiの培養液上清を用いて抗体の反応性を調査したところ，Swolleninと思われる約70 kDaのタンパク質と反応性を示した。今後は，本抗体を使用してバイオマス中におけるSwolleninの局在性を調査する予定である。② Swolleninのセルロースへの吸着力ーSwolleninのセルロースへの吸着力を各種CBM1を有するセルラーゼと比較した。Swolleninは，CBH1と同様にセルロースに吸着したタンパク質の90%以上が離脱することから，可逆的な吸着であると考えられた。
2. Swolleninの発現時期と発現量の調査
リアルタイムPCR法によって調査を行った。Swolleninの発現時期はセルラーゼ（cbh1, cbh2, eg1）と完全に一致していることが明らかとなった。セルロースをC源としたときの発現量は，cbh1と比較して約4%であり，Reference gene (act1)に比較すると約200%であった。
3. 各種セルラーゼ成分の調製
Swolleninによる活性促進効果を調査するために，T. reesei由来の各種セルラーゼ成分を組換え酵素として調製した。麹菌を利用した発現系を構築し，計画通りにCBH1, CBH2, EG1, EG2, EG4, BGL1の発現に成功し，精製を完了した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
当初の予定よりも抗体の反応性の評価に時間を要し，Swolleninの局在性の調査が年度内に実施できなかったため，やや遅れていると判断した。その他の項目については，当初の研究計画を予定通り実行できている。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成26年度の結果を受けて，以下のように実施する。
1. Swolleninの局在性の調査（H26年度に未実施の項目）
2. セルラーゼ反応に対するSwolleninの活性促進効果
3. Swolleninによるセルロースの膨潤とセルラーゼ反応の関連性の調査
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