2014 Fiscal Year Research-status Report
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25460038
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
中村 照也 熊本大学, 生命科学研究部, 助教 (40433015)
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2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | DNA修復 / DNA複製 / 構造生物学 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
生物の生命活動は，遺伝情報物質であるDNAの複製，転写，さらには修復により，高度に維持されている．DNAの複製・転写・修復は，互いに密接に共役しているため，これらの機構を包括的に理解することが必要不可欠である．本研究対象のDNA酸化損傷の修復に関わるDNAグリコシラーゼは，DNA複製の主要因子PCNAとの相互作用を介して，複製と共役したDNA修復を行う．本研究では，DNAグリコシラーゼが細胞内で実際に働く姿である機能型修復複合体をＸ線結晶構造解析により決定し，複製と共役したDNA修復過程において，DNAグリコシラーゼがどのようにして損傷部位へリクルートされ，正しく塩基除去修復を行うのかという動作機序を構造学的に解明する．
これまでに作製した発現領域の異なるDNAグリコシラーゼおよびPCNAの大量精製を行った．これらを用いて，DNAグリコシラーゼの機能型複合体およびDNAグリコシラーゼとDNA複合体を調製した．結晶化スクリーニングは微量結晶化装置を用いて行い，DNAグリコシラーゼの機能型複合体については，幾つかの条件で微結晶を得た．現在これらの条件における結晶化の再現性の確認とさらなる結晶化条件の探索を行っている．また，DNA複合体についても幾つかの条件で結晶を得た．さらに，マイクロリットルスケールでの結晶化条件の精密化，結晶の大型化を行い，X線回折実験可能な大きさのDNA複合体結晶を得た．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
機能型複合体，DNA複合体ともに結晶が得られ始めたので，おおむね順調に研究は進展している．
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| Strategy for Future Research Activity |
機能型複合体については，DNAグリコシラーゼの発現領域，DNAの長さ・配列の検討も含めて実験を行う．DNA複合体については，X線回折実験を行い，構造解析を進める．
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| Causes of Carryover |
発現・精製プロトコールの改良に伴い，予定よりも試薬使用量を少し削減することができたため．
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
来年度行う結晶化実験を中心に使用する．
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