2015 Fiscal Year Research-status Report
ウイルス・マイクロＲＮＡによる宿主細胞の自然免疫反応への対抗機構の解明
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25460075
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| Research Institution | Musashino University |
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Principal Investigator |
土方 貴雄 武蔵野大学, 薬学研究所, 教授 (70189786)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | マイクロRNA / SV40 / DNA複製 / miR-S1 / T抗原 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
SV40がもつマイクロRNAであるmiR-S1の役割として当初感染細胞の自然免疫反応に対する抵抗性の作用を想定しmiR-S1によるサイトカインの発現制御について昨年度途中まで検討した。しかしながらサイトカイン発現制御に対するmiR-S1の直接作用は予想以上に小さく実際的でないことが明らかになったため、今年度はmiR-S1がウイルスのDNA複製を制御することで間接的にTLR９などを介した自然免疫の応答性を低下させているという観点に切り替えた。そこでまずmiR-S1のSV40のDNA複製における役割を検討した。miR-S1をもつSV40ベクターとmiR-S1発現が欠損する変異SV40ベクターをHEK293細胞にトランスフェクションし、それぞれのSV40のDNA複製についてｑPCRにより検討した結果、miR-S1欠損のSV40においてDNA複製の有意な増加が認められた。このDNA複製の増加は、miR-S1欠損によるT抗原の増加を伴っていた。そこで、T抗原の発現量とDNA複製との関係を調べたところ、十数倍程度までのT抗原の増加はDNA複製の増加となるが、T抗原の数十倍の過剰発現は逆にDNA複製を阻害することが明らかになった。逆にSV40ベクターとmiR-S1をHEK293細胞で共発現させると、T抗原の発現量は著しく低下しそれに伴いDNA複製も著しく低下することが明らかになった。以上のことから、miR-S1がT抗原の発現を抑えることでDNA複製を抑制し、ウイルスDNAに特徴的な非CpGメチル化CpGDNAを減らし、この特徴的ウイルスDNAを感知するTLR９の監視を免れていることが考えられた。これにより、SV40ウイルスの潜伏性も保障されているのかもしれない。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
当初の計画ではmiR-S1の宿主細胞の自然免疫に対する直接作用を縦断爆撃的に検討していたために時間がかかった。さらに、直接作用が少ないあるいはないとして見切りをつけるまでが遅かったことと、miR-S1と自然免疫との関連性に関する新たな着眼点を見出すことや、焦点を絞り込むのにも時間がかかったので遅れてしまった。
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| Strategy for Future Research Activity |
今年度の研究によりmiR-S1がSV40のDNA複製を抑制する、つまりウイルスDNA量が減少することが明らかになったので、今後この感染細胞内のウイルスDNA量に着目しウイルスDNAに対する細胞免疫の監視役であるTLR9の複製ウイルスDNAに対する応答性について検討する予定である。具体的には、miR-S1をもつSV40ベクターとmiR-S1発現が欠損する変異SV40ベクターをTLR9を発現している細胞（A549細胞やHela細胞）にトランスフェクションし、増幅したSV40DNAがTLR9を介して誘導するIL1β、TNFαやケモカイン（MCP-1)の発現量について解析する計画である。しかしながら、いくつかの問題点あるいは未知な点がある。まず、TLR９は複製したSV40 DNAを感知するのか？また、細胞はウイルスに対する防御策としてSV40DNAをメチル化しないのか？さらには癌細胞でなく正常な細胞において、複製したSV40DNAに対するどんな防御反応を示すのか？これらの課題や未知な点を明らかにしつつ、得られた実験結果を当研究目的の宿主細胞の自然免疫に対する対抗メカニズムにつなげていく予定である。
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| Causes of Carryover |
当初の研究計画に沿った実験でははっきりとした結果が得られなかったので、方策を勘案し実験を行わず検討する時がありその間は経費がかからなかったことと、その後実験をしても探索的予備実験でシステマティクなものでなかったため経費がそれほどかからなかったことによる。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
ウイルスDNAの複製に対するTLR9による反応性の実験経費、投稿論文の英語校正ならびにジャーナルにより投稿費用に用いる予定である。
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Research Products
(1 results)
