2013 Fiscal Year Research-status Report
EXiLE法と質量分析法とを用いたアレルゲンエピトープの網羅的解析技術の開発
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25460082
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | National Institute of Health Sciences |
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Principal Investigator |
中村 亮介 国立医薬品食品衛生研究所, 医薬安全科学部, 室長 (50333357)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中村 里香 国立医薬品食品衛生研究所, 代謝生化学部, 研究員 (40643333)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | アレルゲン / EXiLE法 / 質量分析法 / IgE / ルシフェラーゼ / エピトープ |
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| Research Abstract |
我々は、ラット培養マスト細胞株に、ヒトの高親和性IgE受容体（FcεRI）を安定的に発現させたRBL-SX38細胞をさらに改変し、転写因子NF-ATの活性化によりルシフェラーゼ発現を誘導できる新しい細胞株、RS-ATL8細胞を樹立した。この細胞株は、IgEを介する特異抗原の刺激によりルシフェラーゼ発現を誘導する。この試験法を我々はIgE crosslinking-induced luciferase expression（EXiLE）法と読んでいる。RS-ATL8細胞は、ヒトFcεRIを介してヒトのIgEにより感作できる他、内在性のラットFcεRIによりラットおよびマウスのIgEによっても感作することができる。そこで、Chondrex社から市販されているFcεRI架橋を誘導できるとされるマウス抗卵白アルブミン（OVA）-IgEモノクローナル抗体（E-C1）と、誘導できないとされる抗OVA-IgE抗体（E-G5）によりこの細胞を感作し、液相中および固相化した抗原（OVAおよびその消化断片）へのEXiLE応答を定量的に評価した。その結果、E-C1抗体により感作されたRS-ATL8細胞は液相中のOVAに応答して刺激前の6倍程度のルシフェラーゼ発現を誘導した。OVAを固相化した場合も同様であったが、この場合、ルシフェラーゼ発現は刺激前の50倍以上まで上昇した。抗原を固相化前に70℃または90℃で加熱すると、応答は劇的に向上し、約1/1000の抗原濃度で非加熱抗原と同程度の応答が誘導できた。一方、E-G5抗体で感作した場合は、液相中の抗原には全く応答しなかったが、抗原を固相化することにより刺激前の50倍以上という明瞭な応答が観察されるようになった。加熱の影響はほとんどなかった。消化断片への応答性も基本的に同様であったが、E-G5の応答性の方がやや消化に弱かった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
研究代表者の異動および研究分担者の離職により、LC/MS/MSの条件検討が当初計画よりやや遅れている。EXiLE法に関する進捗は順調である。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度以降は、各種酵素処理により断片化した固相化抗原への応答性を解析し、エピトープ探索を行なう。
なお、離職した研究分担者が遂行する予定であったLC/MS/MSに関する実験は、研究分担者が所属していた部署より研究協力者を得ることができ、全体としての研究の遂行には大きな問題はないものと考えている。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
次年度初頭（４月９日～４月１１日）に海外（スイス）での学会に参加することになったが、３月中に渡航費等を支出することができなかったため。
当初の計画に加え、次年度初頭（４月９日～４月１１日）に海外（スイス）での学会に参加するための渡航費等を新たに計上する。
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Research Products
(10 results)
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[Journal Article] Expression of CD203c on basophils as a marker of immunoglobulin E-mediated l-asparaginase allergy2014
Author(s)
Hino M, Shimojo N, Ochiai H, Inoue Y, Ando K, Chikaraishi K, Ota S, Okimoto Y, Sunami S, Nakamura R, Teshima R, Sato Y, Kohno Y
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Journal Title
Leuk Lymphoma
Volume: 55
Pages: 92-96
DOI
Peer Reviewed
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