2013 Fiscal Year Research-status Report
標的認識機能を兼ね備えたAib含有へリックスペプチドの核酸医薬への応用
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25460161
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Osaka University of Pharmaceutical Sciences |
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Principal Investigator |
和田 俊一 大阪薬科大学, 薬学部, 准教授 (30278593)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | Aib / 両親媒性ヘリックスペプチド / 膜透過性ペプチド / 核酸医薬 / アンチセンス / siRNA |
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| Research Abstract |
１．Aib 含有ヘリックスペプチドのデザインと合成・・・ペプチドの合成は，Fmoc-固相合成法で行い，以下のアミノ酸配列のように Aib (α-aminoisobutyric acid) と Lys を組み合わせて両親媒性ヘリックス構造を持つペプチドの合成を行った．以下のペプチドを基本配列とし，その基本配列中の疎水性面側のアミノ酸残基の２，８，１４，２０番目に Cys 残基を組み込んだペプチドを合成した．この Cys 残基の側鎖チオール基を介してがん細胞に高率に発現しているインテグリンレセプターに親和性の高い環状ペンタペプチド [cyclic(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Cys-)] を結合させた．両親媒性ヘリックスペプチド中における，環状ペンタペプチドの位置や数の異なるペプチドアナログを５種合成した．
基本配列：Ac-Lys(1)-Leu(2)-Aib(3)-Leu-(4)-Lys(5)-Leu(6)-Aib(7)-Leu(8)-Lys(9)-Aib(10)-Leu(11)-Lys(12)-Ala(13)-Aib(14)-Leu(15)-Lys(16)-Leu(17)-Aib(18)-Gly(19)-NH2
２．Aib 含有ヘリックスペプチド－オリゴヌクレオチド複合体のヌクレアーゼ抵抗性の検討・・・上記の基本配列を有したペプチドと一本鎖 15mer オリゴヌクレオチドとを静電的相互作用を利用して複合体を形成させ，哺乳類由来血清中での安定性を検討したところ，反応２４時間で６０％以上のオリゴヌクレオチドが安定に存在していることが分かった．故に，オリゴヌクレオチドがペプチドとの複合体を形成することにより血清中での安定性が上昇することが分かった．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
両親媒性ヘリックスペプチドに Cys のチオール基を介して環状ペンタペプチドを結合させる合成実験に手間取った．このことが，H２５年度の達成度に影響した．しかし，種々反応条件を検討し，この合成にはH２５年度中に成功している．
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| Strategy for Future Research Activity |
上記に記したようにH２５年度の研究計画において達成度がやや遅れていることから，H２６年度以降は，より効率良く研究を推進していく予定である．H２６年度からは，細胞を用いた実験にシフトしていくことから，アッセイ法については既に確立しているので，合成したペプチドの細胞実験はスムーズに推進していくことが可能であると期待できる．
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