2015 Fiscal Year Annual Research Report
神経ペプチド上の過酸化脂質由来の化学修飾解析:神経変性疾患への新規アプローチ
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25460186
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
李 宣和 東北大学, 薬学研究科(研究院), 助教 (60519776)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大江 知行 東北大学, 薬学研究科(研究院), 教授 (10203712)
後藤 貴章 東北大学, 薬学研究科(研究院), 講師 (40344684) [Withdrawn]
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | oxidative stress / lipid peroxidation / angiotensin II / EDE / HPNE / mass spectrometry |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1. 4,5-Epoxy-2(E)-decenal (EDE) と 4-hydroperoxy-2(E)-nonenal (HPNE)によるアンジオテンシン(Ang) II修飾反応の解析
EDE と HPNE は、N-末端および His6 を優先的に修飾する事を明らかにした。付加体は、N-置換ピロール（[N-C4H2]-Ang II）および Michael 付加体（[His6(EDE)]-Ang II）に加え、主生成物として脱水体であった。 [N-(EDE - H2O)]-Ang II の異性体が確認された事から、カルビノールアミン中間体の互変異性、分子内環化反応、脱水を経る反応経路が示唆された。 主な HPNE-由来の修飾体は、[His6(HPNE)]-Ang II および [N-(HPNE - H2O)]-Ang IIであったが、 HPNE を前駆体とする4-oxo-2(E)-nonenal, 4-hydroxy-2(E)-nonenal, malondialdehyde由来の修飾体も確認した。更にリノール酸の過酸化による主要修飾を確認すべく、13-HPODE と[13C18]-13-HPODE混液(1:1) を用いて検討した。その結果、MSスペクトル上特徴的な [M+H]+のダブレットピーク (1:1) を示す以下の主要な修飾体を確認した。これらの結果は以下の論文で発表した。：Takahashi et al. Chem.-Biol. Interact. 239, 87-99, 2015. DOI: 10.1016/j.cbi.2015.06.029)
2. ヒト血漿中α-ketoamide Angペプチドの検出
内標準物質として[13C5, 15N1]-Ang P を [13C5, 15N1]-Ang IIから調製した。Girard試薬による誘導体化条件および固相抽出とイオン交換クロマトグラフィーを用いるクリーンアップ法を最適化した。LC/ESI- 選択反応モニタリング/MS法を開発した。最適化した方法論を用いて、ヒト血漿中のα-ketoamide Ang を分析予定である。
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