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2014 Fiscal Year Research-status Report

肝臓をモデルとした、発生・再生過程での組織幹細胞の性状変化の解析とその応用

Research Project

Project/Area Number 25460271
Research InstitutionSapporo Medical University

Principal Investigator

谷水 直樹  札幌医科大学, 医学部, 准教授 (00333386)

Project Period (FY) 2013-04-01 – 2016-03-31
Keywords肝幹細胞 / 肝臓 / 肝細胞 / 胆管上皮細胞 / 組織幹細胞
Outline of Annual Research Achievements

前年度までの研究で、EpCAM(+)肝幹・前駆細胞特異的に発現している転写因子grainyhead-like 2がEpCAM(+)肝幹細胞からの肝細胞分化を抑制することを明らかにした。そこでさらに、Grhl2の下流で発現が変化するmicroRNAを探索したところ、miR122の発現を抑制する可能性が示唆された。miR122の発現は、肝芽細胞から肝細胞への分化に伴い発現が上昇するが、胆管上皮細胞への分化に伴い発現が低下していた。miR122をEpCAM(+)肝幹細胞由来のコロニーに導入したところ、肝細胞マーカーであるアルブミンの発現が増加した。Grhl2がmiR122の発現を直接制御している可能性を調べるために、miR122のプロモーターおよびエンハンサー領域をクローニングし、ルシフェラーゼアッセイを行った。その結果、Grhl2はmiR122の発現を転写レベルで制御していることが明らかになった。
慢性肝障害時に、肝細胞の脱分化によって生じるSox9(+)肝前駆細胞の性状を明らかにするために、マイクロアレイを用いて成熟肝細胞との比較を行った。その結果、細胞表面抗原であるCD24の発現が上昇していることが明らかになった。FACSを用いてSox9(+)肝前駆細胞での発現を調べたところ、So9(+)細胞はCD24(-)とCD24(+)細胞に分画できること、CD24(+)はCD24(-)と比較してさらに脱分化が進行していることが明らかになった。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

転写因子Grhl2による肝幹前駆細胞の分化能の制御について、新たにmiR122を介したメカニズムがあることを見出した。上皮細胞の分化成熟化を促す因子であるGrhl2が、細胞の分化可塑性を制御している分子メカニズムを、さらに詳細に明らかにすることができた。また、Sox9(+)前駆細胞には、Subfractionが存在していることが明らかになった。これにより、肝細胞の前駆細胞化の過程をより詳細に明らかすることが可能になった。発生期に存在するEpCAM(+)肝幹細胞および障害時に出現するSox9(+)肝前駆細胞の生体内での役割についての解析には至っていないが、In vitroでの解析を確実に進めることができていると考えている。

Strategy for Future Research Activity

障害誘導性のSox9(+)細胞の移植実験やSox9(+)細胞の分化能を決定している分子メカニズムの解析を行い、障害誘導性の肝細胞の性状変化および肝前駆細胞の生理的機能を明らかにしたいと考えている。また、細胆管反応を伴う肝障害の他に、急性劇症肝炎モデルであるAcetaminophen投与モデルでのSox9(+)肝細胞出現の有無や、Diethylnitrosamine投与肝発現モデルにおいてSox9(+)細胞の出現がみられるかどうかについての検討を行っていく。このような実験を行うことでも、Sox9(+)肝細胞の障害からの組織再生や障害に対する組織保護作用などの観点からも、肝細胞の前駆細胞化の意義を明らかにする。
また、発生過程における肝幹細胞の分化能変化のメカニズム解析をさらに進め、増殖能の高い肝幹細胞からの肝細胞分化を促進する方法を見出したいと考えている。

Causes of Carryover

実験に使用するTGマウスの輸送費として使用する予定であったが、輸送元の都合上、今年度の輸送が困難となったため、次年度に輸送することになった。

Expenditure Plan for Carryover Budget

TGマウスやマウス移植系を用いて、肝幹細胞や肝前駆細胞のin vivoでの分化能や機能の解析を行う。

  • Research Products

    (18 results)

All 2015 2014 Other

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results,  Open Access: 2 results,  Acknowledgement Compliant: 1 results) Presentation (15 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Downregulation of miR122 by grainyhead like-2 restricts the hepatocytic differentiation potential of adult liver progenitor cells.2014

    • Author(s)
      Tanimizu N, Kobayashi S, Ichinohe N, Mitaka T.
    • Journal Title

      Development

      Volume: 141 Pages: 4448-4456

    • DOI

      10.1242/dev.113654

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Soluble lutheran/basal cell adhesion molecule is detectable in plasma of hepatocellular carcinoma patients and modulates cellular interaction with laminin-511 in vitro.2014

    • Author(s)
      Kikkawa Y, Miwa T, Tanimizu N, Kadoya Y, Ogawa T, Katagiri F, Hozumi K, Nomizu M, Mizuguchi T, Hirata K, Mitaka T.
    • Journal Title

      Exp. Cell Res.

      Volume: 328 Pages: 197-206

    • DOI

      10.1016/j.yexcr.2014.07.012

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Presentation] 胆管構造の3次元解析の結果から肝組織形成の過程を考える2015

    • Author(s)
      谷水直樹、金子洸太、伊藤暢、三高俊広
    • Organizer
      第21回日本肝臓医生物学研究会
    • Place of Presentation
      しいのき迎賓館、金沢市
    • Year and Date
      2015-03-28 – 2015-03-28
  • [Presentation] 慢性肝障害時に誘導されるSox9(+)肝前駆細胞の組織再生への寄与2015

    • Author(s)
      谷水直樹、西川祐司、市戸義久、三高俊広
    • Organizer
      第14回日本再生医療学会総会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜、横浜市
    • Year and Date
      2015-03-19 – 2015-03-21
  • [Presentation] 骨髄間葉系幹細胞移植によるRetrorsine/部分肝切除モデルラット肝再生促進機序の解析2015

    • Author(s)
      石井雅之、市戸義久、木野潤一、谷水直樹、三高俊広
    • Organizer
      第14回日本再生医療学会総会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜、横浜市
    • Year and Date
      2015-03-19 – 2015-03-21
  • [Presentation] 障害肝由来Thy1陽性細胞移植における内在性肝前駆細胞増殖機構の解析2015

    • Author(s)
      市戸義久、石井雅之、木野潤一、今純子、谷水直樹、三高俊広
    • Organizer
      第14回日本再生医療学会総会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜、横浜市
    • Year and Date
      2015-03-19 – 2015-03-21
  • [Presentation] 転写因子Grhl2によるマウス胆管上皮細胞の分化可塑性の制御2014

    • Author(s)
      谷水 直樹、小林 誠司、三高 俊広
    • Organizer
      第37回日本分子生物学会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜、横浜市
    • Year and Date
      2014-11-25 – 2014-11-27
  • [Presentation] Lineage plasticity of cholangiocytes and hepatocytes in liver regeneration.2014

    • Author(s)
      Tanimizu N, Nishikawa Y, Mitaka T.
    • Organizer
      第18回日本肝臓学会大会
    • Place of Presentation
      ポートピアホテル、神戸市
    • Year and Date
      2014-10-23 – 2014-10-25
  • [Presentation] マウス肝臓の胆管形成過程の3次元的解析2014

    • Author(s)
      谷水直樹、金子洸太、伊藤暢、三高俊広
    • Organizer
      第87回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      国立京都国際会館、京都市
    • Year and Date
      2014-10-14 – 2014-10-16
  • [Presentation] Thy1陽性細胞移植における内在性肝前駆細胞増殖機構の解析2014

    • Author(s)
      市戸義久、石井雅之、今純子、谷水直樹、三高俊広
    • Organizer
      第47回北海道病理談話会
    • Place of Presentation
      旭川グランドホテル、旭川市
    • Year and Date
      2014-10-11 – 2014-10-11
  • [Presentation] 細胞移植と内在性肝前駆細胞の増殖2014

    • Author(s)
      三高俊広、市戸義久、石井雅之、谷水直樹
    • Organizer
      第21回日本肝臓医生物学研究会
    • Place of Presentation
      天神の湯、静岡市
    • Year and Date
      2014-10-04 – 2014-10-04
  • [Presentation] Molecular mechanisms defining the lineage plasticity of cholangiocytes.2014

    • Author(s)
      Tanimizu N, Mitaka T.
    • Organizer
      FASEB Summer Research Conference
    • Place of Presentation
      Keystone, CO, USA
    • Year and Date
      2014-07-06 – 2014-07-11
  • [Presentation] マウス胆管形成過程の3次元的解析2014

    • Author(s)
      谷水直樹、金子洸太、伊藤暢、三高俊広
    • Organizer
      第21回肝細胞研究会
    • Place of Presentation
      東京医科歯科大学、東京都文京区
    • Year and Date
      2014-06-27 – 2014-06-28
  • [Presentation] Thy1陽性細胞移植におけるレシピエント由来肝前駆細胞増殖機構の解析2014

    • Author(s)
      市戸義久、石井雅之、今純子、谷水直樹、三高俊広
    • Organizer
      第21回肝細胞研究会
    • Place of Presentation
      東京医科歯科大学、東京都文京区
    • Year and Date
      2014-06-27 – 2014-06-28
  • [Presentation] 胆管上皮細胞の分化能を制御する分子メカニズムの解析2014

    • Author(s)
      小林誠司、谷水直樹、三高俊広
    • Organizer
      第21回肝細胞研究会
    • Place of Presentation
      東京医科歯科大学、東京都文京区
    • Year and Date
      2014-06-27 – 2014-06-28
  • [Presentation] 障害肝由来Thy1陽性細胞における肝再生機構の解析2014

    • Author(s)
      市戸義久、石井雅之、今純子、谷水直樹、三高俊広
    • Organizer
      第50回日本肝臓学会総会
    • Place of Presentation
      ホテルニューオータニ、東京都千代田区
    • Year and Date
      2014-05-29 – 2014-05-30
  • [Presentation] 障害肝由来Thy1陽性細胞移植における肝再生機構の解析2014

    • Author(s)
      市戸義久、石井雅之、今純子、谷水直樹、三高俊広
    • Organizer
      第103回日本病理学会総会
    • Place of Presentation
      広島国際会議場、広島市
    • Year and Date
      2014-04-24 – 2014-04-26
  • [Remarks] 札幌医科大学フロンティア医学研究所 組織再生学部門

    • URL

      http://web.sapmed.ac.jp/canpath/Tissue_Development_%26_Regeneration/Tissue_Devel%26Regen.html

URL: 

Published: 2016-05-27  

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