2014 Fiscal Year Research-status Report
不整脈基質としてのイオンチャネル異常にかかわるマイクロRNA機能制御の解明
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25460292
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| Research Institution | Oita University |
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Principal Investigator |
小野 克重 大分大学, 医学部, 教授 (40253778)
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2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | ヒト心筋 / 心房細動 / イオンチャネル / リモデリング / マクロRNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ヒト心房筋の全RNAの網羅的解析の結果に関して
保存しているヒト心房筋の全RNA標本を用いて、イオンチャネル遺伝子を含む全mRNAの発現をDNAチップ法を用いて解析した。その結果、持続性心房細動心筋ではINa(SCN5A), IKACh(KIR3.1), ICa(CaV1.2)等の遺伝子の発現低下が認められ、その遺伝の発現を制御する機構の破綻が示唆された。このようなイオンチャネルのリモデリングが形成されているヒト心筋を用い、心房細動に特異的なマイクロRNAの発現を特定した。この過程で、コンピューター探索ソフトウェアを用いて2群間で有意に発現が異なり、かつ転写制御と発現の関連の強い遺伝子（RNA干渉とマイクロRNA）が同定された。同遺伝子はRT-PCR法を用いて心房細動心筋に発現することを再確認された。さらに、本結果は同マイクロRNAを動物心細胞に導入する、発現実験を通して再確認された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
動物細胞での機能を解析するために、初代培養ラット心筋細胞にmiR-Xを過剰発現させたところ、導入したオリゴ(Pre-miRNA molecule）の濃度依存的にK+チャネルmRNA発現量は抑制された。一方、Anti-miR miRNA inhibitorを用いてノックダウンするとK+チャネルmRNA発現量は濃度依存的に増加した。さらに我々は、miR-XとAfに関する研究報告はこれまでに無いため、本事業の結果からmiR-Xは心筋の電気的にリモデリング成因において重要な因子であると考えられる。したがって、miR-XはAfの発症や維持に関与している可能性が示唆され、miR-Xの発現異常の解析は心筋の電気リモデリングによるAf発症メカニズムの解明には欠かせないと考えられる。以上の、結果は申請時の計画書の平成25年度達成計画書に沿った実施に一致するものであり、研究は順調に進行している。
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| Strategy for Future Research Activity |
本年はAfの発症病態にどのように関るかを個体レベルで解析して、miR-Xの発現異常が心筋の電気的リモデリングの成因なのか、それとも防御機構のひとつなのかを解明する目的でmiR-X transgenic ratの作製を試みたい。それと並行して、慢性Afで異常発現するmiR-Xが心筋細胞の電気活動にどのような影響を及ぼすかを明らかにするために、miR-Xを過剰発現あるいはノックダウンした心筋細胞の電気的性質の変化をパッチクランプ法により解析する。さらに、ラット心臓特異的プロモーターであるalphaMHCの下流にmiR-Xの前躯体を含む領域をつなげたベクターを構築し、ラットの頸静脈からmiR-Xプラスミドをinjectionして心筋特異的にmiR-X過剰発現状態にして、プラスミド投与前後の心電図を記録することで、Afが発症するかどうかを確認したい。さらにAfの発症頻度や持続時間を評価し、世界で初めての慢性Afモデル動物を樹立したい。
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| Causes of Carryover |
少額残余（1672円）のなり、同金額で使用予定が立たないため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
少額残余（1672円）であり、事務用品等の購入に充てたい。
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Research Products
(1 results)
