2013 Fiscal Year Research-status Report
胎生期に高発現するPPARγ3のマウス後期胚における局在と機能解析
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25460299
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Saitama Medical University |
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Principal Investigator |
竹中 康浩 埼玉医科大学, 医学部, 研究員 (20586789)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中野 貴成 埼玉医科大学, 医学部, 助教 (20406474)
井上 郁夫 埼玉医科大学, 医学部, 准教授 (60232526)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 免疫染色 / ノックアウトマウス / 腸管 |
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| Research Abstract |
本研究では申請者が見いだしたマウスの新規スプライシングバリアントPparγ1sv（PPARγ3より遺伝子名変更）のマウス胎児期における発現部位と機能を明らかにし、PPARγの発生における役割を解明することを目的とする。平成２５年度の研究では、ベリタス社で販売されているQuantiGene ViewRNA法を用いてマウス胚切片におけるPparγ1svの特異的な検出を試みたが、Pparγ1svの発現量が低いためか明瞭な発現部位を同定することが出来なかった。そこで同じくマウス胚切片を用いたPPARγ抗体による組織免疫染色を試みた。その結果微弱ではあるが腸管の一部でPPARγの発現を認めることが出来た。
一方Pparγ1svの胎生期における機能を解明するため、申請者と研究分担者（中野、井上）は Pparγ1svにユニークなエクソンCのみを欠損したノックアウトマウスの作製を行った。現在のところエクソンCのホモKOマウスの作製に成功した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
QuantiGene ViewRNA法によりマウス胚切片におけるPparγ1svの特異的な検出を試みた。本実験に際してマウス胎児のサンプリング、固定、包埋、切片作製等を行ったが、その最適条件の設定に予想以上に時間がかかった。またQuantiGene ViewRNA法による結果があまり思わしくなく、解析法の変更を余儀なくされた。さらに免疫染色に使用できるPPARγ抗体の選別に時間がかかり、年度末になってやっと染色像が得られるまでの状態になった。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後はPPARγ抗体を使った免疫染色を更に詳細に解析していくとともに、さらにそこからマイクロダイセクションによって染色組織の一部をサンプリングし、これよりqPCR法により各PPARγバリアントの発現量比を明らかにする。マイクロダイセクションについては昨年度本学に新しい機器が入った為、研究をこれまで以上に迅速に推進していきたい。またKOマウスの解析は一部外部受託機関に依頼することも検討してこれまで以上に研究を推進していきたい。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
物品費（消耗品）について、複数の業者に見積もりをとってもらい、出来るだけ割引率のいい業者に毎回発注するなどして予想以上に支出額を抑える事が出来たため。
次年度の物品費（消耗品）に充当する予定である。
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[Journal Article] A novel splicing variant of peroxisome proliferator-activated receptor-γ (Pparγ1sv) cooperatively regulates adipocyte differentiation with Pparγ22013
Author(s)
Takenaka, Y., Inoue, I., Nakano, T., Shinoda, Y., Awata, T., Ikeda, M., Katayama, S.
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Journal Title
PLoS ONE
Volume: vol.8(6)
Pages: e65583
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Computational analysis and functional expression of ancestral copepod luciferase2013
Author(s)
Takenaka, Y., Noda-Ogura, A., Imanishi, T., Yamaguchi, A., Gojobori, T., Shigeri, Y.
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Journal Title
Gene
Volume: vol.528(2)
Pages: 201-205
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] An active C-terminally truncated form of Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase phosphatase-N (CaMKP-N/PPM1E)2013
Author(s)
Ishida, A., Tsumura, K., Oue, M., Takenaka, Y., Shigeri, Y., Goshima, N., Ishihara, Y., Hirano, T., Baba, H., Sueyoshi, N., Kameshita, I., Yamazaki, T.
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Journal Title
BioMed Research International
Volume: Article ID 134813
Pages: 134813
DOI
Peer Reviewed
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