2015 Fiscal Year Annual Research Report
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25460376
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| Research Institution | Kanazawa Medical University |
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Principal Investigator |
石垣 靖人 金沢医科大学, 総合医学研究所, 教授 (20232275)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | RBM8A(Y14) / リン酸化 / PhosTagゲル |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究ではRNA結合もチーフを持つRBM8Aタンパク質について細胞内の役割を検討した。既に、中心体への移行とその役割については腫瘍細胞と神経幹細胞で確認したので、このタンパク質のリン酸化制御と中心体局在との関わりについて詳細な解析を行った。この点を明らかにするために、リン酸化セリンをアラニンに置換した変異体発現ベクターを構築し、細胞内で強発現させて免疫染色を行った。その結果、野生型を発現させた時と同様に変異体においても中心体への局在を明らかにすることができた。以上の結果は、RBM8Aの中心体移行にリン酸化制御は関与していないことを示唆すると考えられる。一方で、これまで中心体局在を解析してきた実験系は免疫染色が主であったために、密度勾配遠心法によって調製した中心体画分を解析した。その結果、RBM8A自身と結合して複合体を形成する因子群が中心体画分に検出された。この過程で、従来細胞質のみに存在するとされてきたUpf2が、核内に存在することも明らかにした。また、複合体構成因子のひとつをゲノム編集によりノックアウトしたが、RBM8Aは中心体へ局在したことから、複合体構成因子の全てが中心体成熟に関与する訳ではないことを明らかにしてきた。この実験結果は、複合体の中でこの因子のみがノックダウンで細胞死が引き起こされなかった結果とも一致する。さらに、RBM8Aのリン酸化を行うキナーゼのスクリーニングを試みたが、siRNAライブラリーを用いた検索等を行ったものの特定できなかった。これまでキナーゼ本体と考えられてきたSRPKファミリーキナーゼを阻害できる阻害剤でもリン酸化を阻害できなかったことから、これら以外の複数のキナーゼが関与している可能性が高いと考えられる。
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