2014 Fiscal Year Research-status Report
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25460384
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| Research Institution | Hamamatsu University School of Medicine |
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Principal Investigator |
中村 悟己 浜松医科大学, 医学部, 特任研究員 (20377740)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
柴田 清 浜松医科大学, 実験実習機器センター, 技術専門員 (80397372)
藤江 三千男 浜松医科大学, 実験実習機器センター, 技術専門員 (90397373)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | LIX1L / RNA結合蛋白質 / 癌細胞 / 標的分子 / チロシンキナーゼ阻害 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
(1)in vivoでのペプチド2130の抗腫瘍効果について明らかにする： 胃癌細胞株MKN45細胞をNOD/SCIDﾇｰﾄﾞﾏｳｽに移植した担癌マウスを作成し、ペプチド2130を担癌マウス(n=3)の腫瘍部位に直接投与することにより、有意に腫瘍形成を抑制しました。(2)LIX1L蛋白質の各種癌組織における発現解析と増殖への関与：免疫染色では胃癌(n=540)；61.9%, 膵臓癌(n=43)；58.1%, 大腸癌(n=50)；56%, 卵巣癌(n=50)；52%, 腎細胞癌(n=58)；50%, 乳癌(n=50)；46%, 肺癌(n=64)；45.3%, 肝細胞癌(n=47)；38.3%, 食道癌(n=51)；29.4%, 前立腺癌(n=53)；24.5%, 甲状腺癌(n=50)；24%でLIX1Lの発現亢進が認められた。また、Western blot法においても各種癌組織における発現亢進が確認された。(3)LIX1L蛋白質の生理活性部位の同定：LIX1Lの136番目のチロシンが特異的にリン酸化されていることが確認された。LIX1L蛋白質のTyr136を標的とし、キナーゼアッセイによるチロシンキナーゼの同定を行い、６種類の候補チロシンキナーゼを同定した。(4)LIX1Lの標的RNAを同定：
LIX1L抗体を用いた免疫沈降（ＲＩＰ）により結合RNAを回収し、次世代シークエンサーを用いて結合RNAを同定した。mRNA以外に多数のsmall RNA(miRNAを含む)を検出し、データベースから１０種類のmiRNAがＬＩＸ１Ｌに結合することが明らかにされた。
以上の結果から､ペプチド2130のin vivoでの抗腫瘍効果を確認し、ＬＩＸ１Ｌを標的とするチロシンキナーゼとＬＩＸ１Ｌが標的とするmiRNAを同定し、標的分子候補として分子標的治療薬開発の基礎的データが得られました。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
1: Research has progressed more than it was originally planned.
Reason
平成26年度の研究計画･方法について、(1)in vivoでのペプチド2130の抗腫瘍効果が確認された。(2)LIX1L蛋白質は大腸癌、肺癌、乳癌、甲状腺癌、食道癌、肝細胞癌、腎細胞癌、前立腺癌、膵臓癌、卵巣癌を含む各種癌組織における発現の亢進を免疫染色とWestern blotにて確認した。(3)LIX1L蛋白質の生理活性部位として、LIX1Lの136番目のチロシンが特異的にリン酸化されていることが確認された。LIX1L蛋白質のTyr136を標的とするキナーゼアッセイにより、６種類の候補チロシンキナーゼを同定した。
(4)LIX1Lの標的RNAをＲＩＰと次世代シークエンサーにて１０種類のmiRNAを同定した。
今年度の研究計画としてはほぼ予定通りに達成することができていると考えています。これらから得られたデータを基にＬＩＸ１Ｌに対する特異的なキナーゼ阻害剤の開発、更にmiRNAを標的とする治療方法についても評価していく。
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| Strategy for Future Research Activity |
(1)LIX1L蛋白質のチロシンキナーゼ阻害剤の検索：ＬＩＸ１Ｌ蛋白質Ｔｙｒ136に対するチロシンキナーゼ６種類について、既存の薬剤による阻害活性効果を評価する。(2) LIX1Lの標的RNAを同定：ＬＩＸ１Ｌと結合する１０種類のmiRNAの標的ＲＮＡを同定し、ＬＩＸ１Ｌの細胞増殖にたいするシグナル経路を明らかにする。また、miRNA以外にも結合するRNAが多く同定されているため、それらとの関連についても検討する。(3)LIX1L蛋白質と結合する蛋白質の解析：LIX1Lは核内と細胞質内で共同してRNAに結合する蛋白質を同定したため、核内と細胞質内での局在に関する検討と癌細胞増殖との関連を評価する。
(4)LIX1Lの癌細胞におけるシグナル経路の解析：LIX1Lから癌細胞増殖促進の機序の概要をまとめる。
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[Journal Article] CLCA2 as a novel immunohistochemical marker for differential diagnosis of squamous cell carcinoma from adenocarcinoma of the lung.2014
Author(s)
Shinmura K, Igarashi H, Kato H, Kawanishi Y, Inoue Y, Nakamura S, Ogawa H, Yamashita T, Kawase A, Funai K, Sugimura H.
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Journal Title
Dis Markers.
Volume: 2014
Pages: 619273
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] RSPO fusion transcripts in colorectal cancer in Japanese population.2014
Author(s)
Shinmura K, Kahyo T, Kato H, Igarashi H, Matsuura S, Nakamura S, Kurachi K, Nakamura T, Ogawa H, Funai K, Tanahashi M, Niwa H, Sugimura H.
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Journal Title
Mol Biol Rep.
Volume: 41
Pages: 5375－5384
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Impaired 8-hydroxyguanine repair activity of MUTYH variant p.Arg109Trp found in a Japanese patient with early-onset colorectal cancer.2014
Author(s)
Shinmura K, Goto M, Tao H, Kato H, Suzuki R, Nakamura S, Matsuda T, Yin G, Morita M, Kono S, Sugimura H.
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Journal Title
Oxid Med Cell Longev.
Volume: 2014
Pages: :617351
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] A novel somatic FGFR3 mutation in primary lung cancer.2014
Author(s)
Shinmura K, Kato H, Matsuura S, Inoue Y, Igarashi H, Nagura K, Nakamura S, Maruyama K, Tajima M, Funai K, Ogawa H, Tanahashi M, Niwa H, Sugimura H.
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Journal Title
Oncol Rep.
Volume: 31
Pages: １２１９－１２２４
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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