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2014 Fiscal Year Research-status Report

MLPAとFISHを用いたヒト固形癌における遺伝子増幅の網羅的研究

Research Project

Project/Area Number 25460452
Research InstitutionKanazawa University

Principal Investigator

大井 章史  金沢大学, 医学系, 教授 (50160411)

Project Period (FY) 2013-04-01 – 2016-03-31
Keywordsgene amplification / MLPA / FISH / 胃癌 / 乳癌 / 大腸癌
Outline of Annual Research Achievements

当院外科で2011年から2013年にかけて手術された胃癌262例のうち進行癌93 例の代表的なフォルマリン固定パラフィン包埋切片から、DNAを抽出し、multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA)を用いて、癌遺伝子の増幅を調べた。検索した遺伝子はERBB2, EGFR, MET, MYC, CCND1, MDM2,TOP2A ほか17遺伝子 (SALSA MLPA KIT P175-A2 Tumor-Gain kit)及びFGFR2, FGF10 (SALSA MLPA probemix P231-A2 kit) である。さらに、32腫瘍において「増幅」あるいは「増加」と判定された16遺伝子の増幅をfluorescence in situ hybridization(FISH)で確認し、遺伝子の過剰発現を免疫染色で検討した。その結果、増幅のみられた遺伝子は以下の如くであった:ERBB2 (13例, 14%), FGFR2 (7例, 8%), MYC (7例, 8%), TOP2A (7例, 8%), MET (4例, 4%), MDM2 (4例, 4%), CCND1 (3例, 3%), FGF10 (2例, 3%), and EGFR (1例, 1%). 受容体型チロシンキナーゼをコードする遺伝子はERBB2とFGFR1の同時増幅が見られた1例をのぞけば、1個の腫瘍に1種類の遺伝子増幅に限られた。この事実は個別化した分子標的治療を考えるうえで有意義であり、Modern Pathologyに発表した。
当院外科で2011年から2013年にかけて手術された乳癌343例の代表的なフォルマリン固定パラフィン包埋切片から、DNAを抽出し、MLPA kits(MLPA P078-B1及び-C1)を用いて、癌遺伝子の増幅を調べた。 8p11-12, 11q13, 17q12に増幅遺伝子がみられ、FISHを用いて、増幅遺伝子の詳細な検討を行っている。
57例の肺転移大腸癌からDNAを抽出しており, MLPAで増幅遺伝子の検索を行う準備が完了した。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

胃癌に関する研究結果をまとめて学会誌に投稿、受理されている。(Mod Pathol 2015, 掲載予定)
乳癌で高頻度に増幅している遺伝子を同定できており、MLPAをほぼ終了し、FISHによる確認中である。大腸癌からのDNA抽出を完了しており、MLPA検索のを開始する段階である。

Strategy for Future Research Activity

胃癌:我々のアドバイスを受けて、MRC-Holland社 (Amsterdam, The Netherlands)より胃癌で増幅頻度の高い16 遺伝子を検索するMLPAキット(SALSA MLPA probemix P458-B1 Gastric cancer)が商品化された。これは、従来、我々が使ってきたSALSA MLPA KIT P175-A2 Tumor-Gain kitのうち胃癌で増幅頻度の低い遺伝子のプローブを削除して、あらたにPIK3CA, GATA4, PTPA3, FGFR2, KRAS, KLF5, GATA6に対するプローブを加えたものである。これによって、今まで2つのMLPA キットを用いて遺伝子増幅を検索してきたが、SALSA MLPA probemix P231-A2 kitが不要となるとともに、あらたに注目されてきた遺伝子の検索が可能となった。今後、このキットを用いて、前回検索にもちいた材料にさらに新たな症例を加えて検索を行う。

  • Research Products

    (14 results)

All 2014

All Journal Article (5 results) (of which Peer Reviewed: 5 results,  Open Access: 2 results,  Acknowledgement Compliant: 4 results) Presentation (9 results)

  • [Journal Article] Intratumoral heterogeneous amplification of ERBB2 and subclonal genetic diversity in gastric cancers revealed by multiple ligation-dependent probe amplification and fluorescence in situ hybridization2014

    • Author(s)
      Tajiri R, Ooi A, Fujimura T, Dobashi Y, Oyama T, Nakamura R, Ikeda H
    • Journal Title

      Hum Pathol

      Volume: 45 Pages: 725-734

    • DOI

      :10.1016/j.humpath.2013.11.004

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Genetic aberrations as the targets of oncology research: Involvement of paraffin-embedded tissues2014

    • Author(s)
      Dobashi Y, Goto A, Endo T, Ooi A
    • Journal Title

      Histol Histopathol

      Volume: 29 Pages: 191-205

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Comparative immunohistochemical analysis of IMP3, GLUT1, EMA, CD146, and desmin for distinguishing malignant mesothelioma from reactive methothelial cells2014

    • Author(s)
      Minato H, Kurose N, Fukushima M, Nojima T, Usuda K, Sagawa M, Sakuma T, Ooi A, Matsumoto I, Oda M, Arano Y, Shimizu J
    • Journal Title

      Am J Clin Pathol

      Volume: 141 Pages: 85-93

    • DOI

      : 10.1309/AJCP5KNL7QTELLYI

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Significance of Akt activation and AKT gene increases in soft tissue tumors2014

    • Author(s)
      Dobashi Y, Sato E, Oda Y, Inazawa J, Ooi A
    • Journal Title

      Hum Pathol

      Volume: 45 Pages: 127-136

    • DOI

      : 10.1016/j.humpath.2013.06.024

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Clonal profiling of mixed lobular and ductal carcinoma revealed by multiplex ligation-dependent probe amplification and fluorescence in situ hybridization2014

    • Author(s)
      Tajiri R, Inokuchi M, Sawada-Kitamura S, Kawashima H, Nakamura R, Oyama T, Dobashi Y, Ooi A
    • Journal Title

      Pathol Int

      Volume: 64 Pages: 231-236

    • DOI

      : 10.1111/pin.12158

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Presentation] MLPAとFISHを用いた胃癌における増幅遺伝子の準網羅的検索2014

    • Author(s)
      大井 章史、田尻 亮輔、尾山 武、中村 律子、伏田 幸夫、土橋 洋
    • Organizer
      73th Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
    • Place of Presentation
      PACIFICO YOKOHAMA, Yokohama
    • Year and Date
      2014-09-25 – 2014-09-27
  • [Presentation] 肺癌におけるAKT遺伝子増加、isoformの発現異常と病的意義2014

    • Author(s)
      土橋 洋、坪地 宏嘉、井上 純、大井 章史
    • Organizer
      73th Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
    • Place of Presentation
      PACIFICO YOKOHAMA, Yokohama
    • Year and Date
      2014-09-25 – 2014-09-27
  • [Presentation] FISH法を用いた膀胱尿路上皮癌におけるCCND1遺伝子増幅の検索2014

    • Author(s)
      田尻 亮輔、尾山 武、中村 律子、大井 章史
    • Organizer
      73th Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
    • Place of Presentation
      PACIFICO YOKOHAMA, Yokohama
    • Year and Date
      2014-09-25 – 2014-09-27
  • [Presentation] アレイCGH法による癌関連遺伝子発現の腫瘍内ヘテロ不均一性を示す部分間におけるゲノムコピー数異常解析2014

    • Author(s)
      尾山 武、中村 律子、田尻 亮輔、大井 章史
    • Organizer
      73th Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
    • Place of Presentation
      PACIFICO YOKOHAMA, Yokohama
    • Year and Date
      2014-09-25 – 2014-09-27
  • [Presentation] Multiple ligation-dependent probe amplificationとFISHを用いた胃癌における遺伝子増幅の準網羅的検索2014

    • Author(s)
      大井章史、田尻亮輔、中村律子、尾山武、池田博子、土橋洋
    • Organizer
      第103回日本病理学会総会
    • Place of Presentation
      広島国際会議場、広島
    • Year and Date
      2014-04-24 – 2014-04-26
  • [Presentation] ヒト肺癌におけるAKT遺伝子、蛋白質の異常とその意義2014

    • Author(s)
      土橋洋、椙村春彦、山田茂樹、大井章史
    • Organizer
      第103回日本病理学会総会
    • Place of Presentation
      広島国際会議場、広島
    • Year and Date
      2014-04-24 – 2014-04-26
  • [Presentation] 腎癌における分泌型タンパクNell1/2の発現機能解析2014

    • Author(s)
      中村律子、尾山武、田尻良輔、大井章史
    • Organizer
      第103回日本病理学会総会
    • Place of Presentation
      広島国際会議場、広島
    • Year and Date
      2014-04-24 – 2014-04-26
  • [Presentation] ヒト胃癌における癌関連遺伝子発現の腫瘍内不均一性を示す部分間における遺伝子発現の相違2014

    • Author(s)
      尾山武、中村律子、田尻良輔、大井章史
    • Organizer
      第103回日本病理学会総会
    • Place of Presentation
      広島国際会議場、広島
    • Year and Date
      2014-04-24 – 2014-04-26
  • [Presentation] Multiplex-ligation dependent probe amplification を用いた 胃癌における分子標的の準網羅的検索。Research Forum 7. 胃腫瘍診療の最前線2014

    • Author(s)
      大井章史、藤村隆
    • Organizer
      第100回日本消化器病学会総会
    • Place of Presentation
      東京国際フォーラム、東京
    • Year and Date
      2014-04-23 – 2014-04-26

URL: 

Published: 2016-05-27  

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