2015 Fiscal Year Research-status Report
癌遺伝子YAP/TAZのタンパク質相互作用ネットワーク解析と腫瘍形成における役割
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25460482
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| Research Institution | Aichi Medical University |
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Principal Investigator |
村上 秀樹 愛知医科大学, 医学部, 准教授 (90303619)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | YAP/TAZ / 類上皮血管肉腫 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
YAP/TAZは様々な腫瘍において腫瘍形成に関与することが示され、新たながん治療の有力な分子標的として注目されている。本研究ではYAP/TAZの腫瘍における役割とTAZ/YAPを中心としたタンパク質相互ネットワークの解析を目指す。様々な腫瘍におけるYAPの発現を免疫組織化学染色を施行し解析を行った。頭頸部の扁平上皮癌においてYAPの核内での発現の増加がみられ、一部でFISH(fluorescent in situ hybridization)法で遺伝子増幅が認められた。頭頸部の扁平上皮癌においてYAPが腫瘍形成に働いているものと考えられ、一部は遺伝子増幅が関与していることが示唆された。また血管系の類上皮肉腫においてTAZとCAMTA1あるいはYAPとTFE3遺伝子の転座による融合遺伝子の発現がみられ、腫瘍形成に重要であることが示されている。Flag-HAをtagしたTAZ/CAMTA1を発現するレンチウイルスベクターを作製し、ヒト正常皮膚血管細胞に発現させた。Tandem affinity精製を行い抽出されたタンパク複合体にTEAD3/4, p73などの転写因子が確認された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
血管内皮細胞でのウイルスの感染効率が低く、感染細胞の薬剤選択することにより解析に必要な細胞量を得るのに時間を要した。また実験毎に複合体中に同定される分子が異なり、安定した実験結果を得るのに苦慮したため。
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| Strategy for Future Research Activity |
質量分析を用いた解析で信頼性のある結果を得るためにより実験条件(培養条件等)を厳密にし、さらに複数回行う。また他の細胞株(HEK293, 扁平上皮癌細胞株)でも確認していく。同定された複合分子の機能解析（増殖能、運動能）を行い、腫瘍形成における役割を明らかにしていく。
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| Causes of Carryover |
繰越金額が生じた理由としては複合体分子の同定において安定した結果が得られず、iTRAQ法による網羅的な比較定量解析、機能解析が本格的に行えなかった為である。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
平成28年度への繰越金額1,967,543円である。平成28年度はiTRAQ解析に必要な試薬、生化学的解析および細胞培養に必要な試薬、消耗品の購入に使用する。また成果の学会、論文としての発表に充当する予定である。
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Research Products
(1 results)
