2015 Fiscal Year Annual Research Report
トランスポゾン誘導型膠芽腫モデルを用いたLgr5＋細胞の特性と新規治療標的の解明
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25460488
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| Research Institution | Kyoto Pharmaceutical University |
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Principal Investigator |
中田 晋 京都薬科大学, 薬学部, 准教授 (80590695)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤田 貢 近畿大学, 医学部, 准教授 (40609997)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 脳腫瘍 / 膠芽腫 / がん幹細胞 / マウスモデル / LGR5 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
LGR5-EGFPトランスジェニックマウスにSleeping Beautyトランスポゾンシステムを用い、EGFRvIII、NRas、shTP53を導入し、自発発症型膠芽腫を作製した。膠芽腫組織はシュードパリセーディング、マイクロネクローシス、腫瘍血管の増生を伴い、臨床でみられる形態と合致していた。この脳腫瘍モデル組織中における低酸素領域をピモニダゾールによる生化学的なマーカーで標識したところ、LGR5陽性細胞が血管周囲領域およびシュードパリセーディングに豊富に存在することを明らかにした。脳腫瘍組織からLGR5陽性細胞を生きた状態で分取することによって、LGR5陽性細胞の特性解析を行った。前向きに分取したLGR5陽性膠芽腫細胞の自己複製能と腫瘍形成能を評価したところ、陰性細胞に比し高いスフェア形成能と腫瘍形成能を保持することを見いだした。さらに、網羅的発現解析の結果、LGR5陽性細胞に高発現する遺伝子群として、パスウェイ解析上Shhシグナルがトップにヒットし、Shhシグナル下流転写因子Gli2、受容体Patched2、標的遺伝子CyclinB1等を含んでいた。また、Shh経路阻害剤によるスフェロイド増殖の抑制と内因性Lgr5発現の低下、Shhアゴニストによるスフェロイド形成の促進と内因性Lgr5発現の増加の双方を確認した。この結果は、LGR5陽性膠芽腫幹細胞分画において、その維持と増幅に対してShhシグナルが促進的に機能していること、またこの特性は低酸素という微小環境が支持していることを明らかにした。
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