2013 Fiscal Year Research-status Report

細胞内ＤＮＡセンサー蛋白とエンドトキシン応答クロストーク

Research Project

Project/Area Number	25460551
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Research Institution	Aichi Medical University
Principal Investigator	横地高志愛知医科大学, 医学部, 教授 (20126915)
Project Period (FY)	2013-04-01 – 2016-03-31
Keywords	エンドトキシン / PYHIN1 / NF-kappaB / インターフェロンβ / 一酸化窒素 / マクロファージ
Research Abstract	エンドトキシンでマクロファージを刺激すると、細胞内DNAを検出するセンサータンパクが増加することを偶然発見した。そこで、細胞内DNAセンサータンパクとエンドトキシン応答のクロストークについて、検討を加えた。マウスマクロファージ株であるRAW264.7細胞をLPSで刺激し、PYHIN1の発現をmRNAレベルで解析し、その増強を確認した。 PYHIN1遺伝子の発現にはNF-kappaB活性化に依存し、それも早期のNF-kappaB活性化が重要であることを見出した。p38,ERK,JNKといったMAPKの関与は除外された。また、LPSにはMyD88依存性、非依存性活性化経路があるが、インターフェロンβに依存しないことから、MyD88依存性経路のNF-kappaB活性化によるものと推定された。 small interfering (si) RNAを使用して、LPSの炎症性サイトカインの産生に及ぼす作用を検討した。PYHIN1 siRNAは腫瘍壊死因子(TNF-α）、インターロイキン６，１０の産生には影響を及ぼさなかったが、インターフェロンβ産生は明らかに抑制した。PYHIN1の発現はNF-kappaB活性化に依存することから、NF-kappaB阻害剤でも抑制されることを確認した。さらに、siRNAの一酸化窒素（NO)産生に及ぼす作用を調べ、NO産生が抑制されることを見出した。PYHIN1siRNAによるNO産生抑制はインターフェロンβ産生抑制と密接に関連し、誘導型NO合成酵素の転写が抑制されたことに起因していた。誘導型NO産生酵素のタンパク発現も減少していた。PYHIN1遺伝子がエンドトキシンによって誘発される炎症反応に関与していることが明らかになった。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 予想通りの結果が得られている。
Strategy for Future Research Activity	PYHIN1遺伝子産物のエンドトキシンシグナルの抑制作用をさらに詳細に検討する。