2013 Fiscal Year Research-status Report
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25460656
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Osaka City University |
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Principal Investigator |
三浦 克之 大阪市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (00183624)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 腎線維化 / マクロファージ / 低酸素 |
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| Research Abstract |
マクロファージ特異的にHIF-1αを欠損させたマウスを用い、腎線維化モデル（一側尿管閉塞）におけるマクロファージの役割を検討した。その結果、尿管閉塞7日目においてHIF-1欠損マウスにおいて腎線維化が増悪することがわかった。しかしながら線維化病変部位に浸潤するマクロファージ数に差はなく、尿細管障害やアポトーシスの程度に差は認められなかった。浸潤した炎症細胞のflow cytometryによる単球／マクロファージ分画の解析においてもLy-6C hiおよびLy-6C loの細胞数は両群とも同程度の増加が認められた。線維化促進因子として知られるTGFβ, CTGFのUUO腎における遺伝子発現を調べたところ、TGFβはUUOにより対照群・HIF-1α欠損群共に著明な発現亢進を認めたが、両群間で有意差を認めなかった。CTGFはUUOにより対象群・HIF-1α欠損群共に著明な発現亢進を認め、対象群に比べHIF-1α欠損群で有意な発現の増加を示した。同様の結果はCTGFの蛋白発現においても認められた。CTGF発現細胞について探るため、HIF-1α欠損群のUUO腎よりCollagenaseを用いて腎細胞を単離し、CD11b MACS beadsを用いて主にマクロファージからなるCD11b陽性細胞と、尿細管上皮細胞・線維芽細胞等の腎実質細胞からなるCD11b陰性細胞にわけて検討したところ、CTGF遺伝子発現は主としてCD11b陰性細胞に認められたことからHIF-1α欠損に伴うCTGFの発現増強は腎実質細胞に由来することがわかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
マクロファージHIF-1αの欠損により腎線維化が増強する機序の一つとして腎実質細胞に由来するCTGF発現増強が関与する可能性を示したから
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| Strategy for Future Research Activity |
今年度はマクロファージ特異的にHIF-1α欠損により腎線維化モデル（一側尿管閉塞）において腎線維化が増強した機序をさらに詳細に検討する。マクロファージ特異的にHIF-1αを欠損したマウスおよび野生型マウスより骨髄由来マクロファージを調製し、低酸素下に培養して得られたconditioned mediumを用いマウス培養近位尿細管細胞mPROX24およびマウス培養腎線維芽細胞の各種線維化関連分子の遺伝子発現に対する効果を検討する。また、腎線維化形成のより早い時期における浸潤マクロファージの特性をHIF-1欠損マウスおよび野生型で比較するため尿管閉塞後早期の腎臓より単離細胞を調製し、flow cytometryによる単球／マクロファージ分画の解析を行うと共に単球／マクロファージ分画をCD11b magnetic beadsで調製し、遺伝子発現を比較する。次に腎線維化におけるHIF-1αの関与にしめる単球／マクロファージの相対的寄与を明らかにするために全身性に時期特異的にHIF-1αを欠損するマウスを用いて検討する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
少額なので使い切らなかずに次年度に繰り越そうと考えた。
少額の繰越金と次年度の予算を用いて、次年度研究計画を遂行する。
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