2013 Fiscal Year Research-status Report
ELISA法を用いた生体内メタロチオネイン-I/II及び-III測定の基礎的検討
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25460672
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Gunma University |
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Principal Investigator |
中里 享美 群馬大学, 保健学研究科, 准教授 (80241909)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中嶋 克行 群馬大学, 保健学研究科, 客員教授 (10444051)
長嶺 竹明 群馬大学, 保健学研究科, 教授 (90180520)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | メタロチオネイン-I/II / メタロチオネイン-III / ＥＬＩＳＡ |
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| Research Abstract |
新たに作製した抗メタロチオネイン（ＭＴ）-IIIモノクローナル抗体を用いて開発したＭＴ-III測定ＥＬＩＳＡ法で行った野生型及びＭＴ-I/IIノックアウト、ＭＴ-IIIノックアウトマウスの肝、腎、脳の組織中ＭＴ-IIIの定量では、肝、腎のＭＴ-III含有量はいずれのマウスも低値で有意差はみられなかったが、脳のＭＴ-III含有量はＭＴ-IIIノックアウトマウスで野生型やＭＴ-I/IIノックアウトマウスに比べて有意な低値を示した。そこで、血清でのＭＴ-III測定の検討を行ったが、マウスなどの動物血清に比べてヒト血清では希釈系列が直線にのらない等のやや不安定で非特異的な反応もみられたため、本ＥＬＩＳＡにおけるＭＴ-III抗体の特異性や検体の前処置などについて再検討を行っている。
本ＭＴ-IIIモノクローナル抗体と以前に作製したＭＴ-I/IIポリクローナル抗体を用いた免疫染色では、ＮＡＳＨ、脂肪肝及び正常のヒト肝生検組織において、ＭＴ-I/IIとＭＴ-IIIとでは明らかに異なる染色性を示した。さらに、ＭＴ-I/IIではＮＡＳＨは脂肪肝や正常肝に比べて、その陽性域が有意に低値であったが、ＭＴ-IIIでは染色性に有意差はみられなかった。本結果から、ＮＡＳＨにおいてはＭＴ-I/IIが病態のマーカーとなり得る可能性が示唆された。
また、銅欠乏により重篤な中枢神経障害をきたすメンケス病のモデル動物であるマクラマウスの血中並びに組織中ＭＴ-I/II濃度について、ＭＴ-I/II ＥＬＩＳＡにより測定を行った。正常マウスに比べてマクラマウスでは、小脳のＭＴ-I/II濃度は著明に減少していたが、腎及び血中ＭＴ-I/II濃度は有意に高値を示した。これらマウスの臓器標本について、現在、ＭＴ-I/IIとＭＴ-III免疫染色を行い、結果を解析中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
当初の計画では、平成25年度中に生体試料（血液や組織等）を用いたＭＴ-III測定ＥＬＩＳＡ法を確立する予定であったが、「研究実績の概要」にも述べたように、ヒト血清での測定において再検討が必要となり、現在検討中である。このため、ヒトや実験動物での肝や血中のＭＴ-I/II濃度測定やＭＴ-I/II及びＭＴ-III免疫染色による病態との関係について研究を進めているが、未だＥＬＩＳＡによるＭＴ-III濃度測定に至っていない。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後はＭＴ-III測定ＥＬＩＳＡ法の確立を目指すとともに、平成２５年度の研究で病態の早期マーカーとしての有用性がうかがえたメンケス病やウィルソン病でのＭＴ発現の意義の解析を進めつつ、他の臓器、疾患についてもＥＬＩＳＡや免疫染色を用いたＭＴ発現の解析を行う予定である。さらに、ＥＬＩＳＡによるＭＴ-III測定が可能になり次第、アルツハイマー病に関するＭＴ-III発現の検討も行う予定である。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
前述したように、ＭＴ-III測定ＥＬＩＳＡ法に再検討の必要が生じ、ＥＬＩＳＡによるＭＴ-III測定に使用する予定であった試薬やプレート等の消耗品の購入が予定していたよりも少なかったためである。
今後、ＭＴ-III測定ＥＬＩＳＡ法の再検討が進み、ＭＴ-III濃度の測定を開始できれば、そのための試薬や消耗品の購入を行う予定である。
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Research Products
(4 results)
