2013 Fiscal Year Research-status Report
血中ｓＣＬＥＣー２測定法の臨床応用と実用化に向けた検討
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25460677
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | University of Yamanashi |
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Principal Investigator |
長田 誠 山梨大学, 医学部附属病院, 臨床検査技師 (20569628)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
井上 修 山梨大学, 医学工学総合研究部, 准教授 (00432154)
尾崎 由基男 山梨大学, 医学工学総合研究部, 教授 (30134539)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | soluble CLEC-2 / ポドプラニン / 抗血小板剤 / 慢性関節リウマチ |
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| Research Abstract |
新規血小板活性化受容体CLEC-2を同定し，その生体内リガンドがポドプラニンであること，癌転移やリンパ管新生に関与する受容体であることを見出した．CLEC-2はヒトでは血小板にほぼ特異的に発現し，活性化に伴い血小板から遊離するため，血中soluble CLEC-2(sCLEC-2) 測定が生体内での血小板活性化マーカーになり得ると考え，ELISA測定系を構築した．sCLEC-2は急性冠症候群患者で有意に高値となり，既存の同様なマーカーと異なり採血手技の影響をほとんど受けなかった．本研究では，sCLEC-2測定が抗血小板薬のモニター法として利用可能であるか探ると共に，ポドプラニン発現癌の患者血漿や，血小板マイクロパーティクル(MP)が増悪因子となる慢性関節リウマチ患者血漿・関節液のsCLEC-2が上昇するか検討する．
動脈血栓症予防に抗血小板剤（アスピリン、クロピドグレル）を服用する予定の患者（脳梗塞患者、心筋梗塞患者、糖尿病患者）の血漿中sCLEC-2 を，服用前後の２回にわたって測定する予定であったが，糖尿病患者の血漿sCLEC-2値が上昇しているか確認するため測定を行った．HbA1c高値の糖尿病患者15名について血漿sCLEC-2測定を実施したところ，有意差は認めなかったが健常人10名に比べ高値となった（健常人平均 98 pg/ml，糖尿病患者平均 157 pg/ml）．他の疾患に関しては，患者の同意，検体採取が遅れているため平成26年度に引き続き検討を行う．
sCLEC-2測定の基礎検討と臨床応用に関する研究成果をまとめた論文を，Thrombosis and Haemostasisに投稿しており，現在，revisionを提出するところである．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
動脈血栓症予防に抗血小板剤を服用する予定の患者，ポドプラニン発現（食道扁平上皮癌，セミノーマ患者，中皮腫患者，脳腫瘍）患者の血漿sCLEC-2測定，慢性関節リウマチ患者の血漿・関節のsCLEC-2測定は，平成25，26年度の2年計画である．全体の疾患における同意書・検体採取が遅れているためsCLEC-2測定が実施できなかった．このことから達成度はやや遅れていると考えられた．
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| Strategy for Future Research Activity |
今年度は，各疾患の同意書・検体採取を早めに終わらせ，sCLEC-2測定を実施するとともに，各疾患の検体を既存の血小板活性化マーカーを用いて測定し，臨床的意義を検討する．また，ポドプラニン発現細胞に洗浄血小板を加えることでsCLEC-2が上昇するか検討する．さらに，次年度の計画である自動化に向けた準備を行う．
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
sCLEC-2測定の抗血小板薬のモニター法としての可能性を探ると共に，ポドプラニン発現癌の患者や，血小板マイクロパーティクル(MP)が増悪因子となる慢性関節リウマチなどの疾患にて血漿sCLEC-2が上昇するか検討することになっていたが，患者検体が収集が遅れているためsCLEC-2測定が実施できず予算を使い切ることができなかった．
sCLEC-2 のELISA 測定プレートの作製は，96 穴プレート，ブロッキング液，洗浄液，検体希釈液，AMDEX, TMB, 停止液等が必要であり，1 次抗体の96 穴プレートへのコーテングから測定を実施する試薬が多数必要である．次年度使用額の使用計画として，ELISA測定プレートの作製と検体測定に用いる試薬を購入する．AMDEX は高価であり，TMB は劣化するので随時購入する．
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