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2014 Fiscal Year Research-status Report

白血病新規マーカーとしての血清ユビキチン測定の有用性の検討

Research Project

Project/Area Number 25460711
Research InstitutionHimeji Dokkyo University

Principal Investigator

炬口 真理子  姫路獨協大学, 薬学部, 准教授 (10379430)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 宮本 和英  姫路獨協大学, 薬学部, 准教授 (10415317)
西郷 勝康  姫路獨協大学, 薬学部, 教授 (20304107)
谷口 泰造  姫路獨協大学, 薬学部, 教授 (70346253)
Project Period (FY) 2013-04-01 – 2016-03-31
Keywordsユビキチン-プロテアソーム系 / プロテアソーム阻害剤 / PML/RARA / ERストレス
Outline of Annual Research Achievements

生体内には生命維持のために蛋白質の品質管理機能があり、その一つはユビキチン-プロテアソーム系(UPS)で行われている。ユビキチン化にはE1、E2、E3の3つの酵素が関与しており、これらは蛋白質固有であり、疾患により疾患関連蛋白のE1、E2、E3が変化することが知られている。
プロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ(ベルケイド)は、2006年多発性骨髄腫(MM)に承認、他の抗悪性腫瘍剤との併用も可能になった。しかし、その作用機序は明らかでなく、その機序を我々は、『ボルテゾミブは、本来UPSで処理されるべき異常蛋白を蓄積させることにより、ER(小胞体)ストレスを過度に高め、そのレスキュー反応であるUPR (Unfolded protein response)を破綻させて、細胞死を誘導する』と考えた。本研究の目的は、(1)この仮説を急性前骨髄性白血病(APL)細胞を用いて証明する (2) APLの疾患原因蛋白であるPML/RARAキメラ蛋白に対するユビキチン化酵素が、APLのバイオマーカーとして臨床適応可能かどうかを検討することである。
我々は以前、PML/RARA蛋白のE3がSIAH-1であることを報告した。今回、SIAH-1に対するE2がUbcH8であることを同定し、更にボルテゾミブによる抗腫瘍効果と細胞中のPML/RARAおよびUbcH8濃度が相関することを見いだした(H25年度)。H26年度、ボルテゾミブの腫瘍効果に比例して、①細胞上清中のUbcH8濃度が増加すること(PML/RARAは増加しない) ②ERストレスマーカーであるXBP-1, BiP/GRP78が増加することを証明した。これは (1) ボルテゾミブは、本来UPSで処理されるべきPML/RARAを蓄積させることにより、ERストレスを過度に高め、UPRを破綻させた結果、細胞死を誘導した (2) PML/RARAに対するE2酵素(UbcH8)の血清中濃度の測定が、APLのバイオマーカーとして臨床応用可能であることを示すものである。この研究成果を、ANTICANCER RESEARCHに報告した(in press)。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

細胞レベルでの実験はほぼ終了し、論文投稿し受理された。

Strategy for Future Research Activity

ボルテゾミブによる抗腫瘍効果を観察するマーカーとして、ユビキチン結合酵素E2(UbcH8)が有用であることが示された。本年度は、生理活性反応測定装置(AMIS-101)を用いて、E2(UbcH8)が測定可能かどうかを検討する。そのためには、まず人工的なE3(SIAH-1)を作製する。そして実際に培養上清中およびAPL担癌マウス血清中の微量E2(UbcH8)を測定し、患者への臨床応用を目指す。

Causes of Carryover

実験継続のため

Expenditure Plan for Carryover Budget

本年度に引き続き、細胞培養用試薬に加え、ペプチド合成のための物品に使用する予定である。また本年度購入を見送ったデータ解析用のパーソナルコンピュータを購入する予定である。

  • Research Products

    (2 results)

All 2015

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results,  Acknowledgement Compliant: 1 results) Presentation (1 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results)

  • [Journal Article] Bortezomib Causes ER Stress-related Death of Acute Promyelocytic Leukemia Cells Through Excessive Accumulation of PML-RARA2015

    • Author(s)
      Mariko Takenokuchi, Kazuhide Miyamoto, Katsuyasu Saigo and Taizo Taniguchi
    • Journal Title

      ANTICANCER RESEARCH

      Volume: 未定 Pages: 未定

    • DOI

      10.1159/000218708

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Presentation] Bortezomib causes ER stress-related cell death in APL through excessive accumulation of PML-RARA2015

    • Author(s)
      Mariko Takenokuchi
    • Organizer
      第77回日本血液学会学術集会
    • Place of Presentation
      石川県立音楽堂
    • Year and Date
      2015-10-16 – 2015-10-18
    • Int'l Joint Research

URL: 

Published: 2016-05-27  

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