2014 Fiscal Year Research-status Report
p53標的大型介在性非コードRNAの同定と機能解析による消化器発癌機構の解明
| Project/Area Number |
25460929
|
|---|
| Research Institution | Sapporo Medical University |
|---|
Principal Investigator |
井戸川 雅史 札幌医科大学, 医学部, 講師 (00404749)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2017-03-31
|
| Keywords | p53 / lincRNA / 癌 / ChIP-seq / lncRNA / non-coding RNA |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
In silico p53結合配列解析とクロマチン免疫沈降産物の次世代シーケンサー解析（ChIP-seq）により絞り込まれたゲノム上のp53結合領域近傍に存在する約150のlincRNA（大型遺伝子介在非コードRNA，lincRNA）について，その発現量を解析した．p53欠失の肺癌細胞H1299，骨肉腫細胞SaOS2にp53ファミリーをアデノウイルスで過剰発現させた系，および大腸癌細胞HCT116とそのp53ノックアウト細胞のアドリアマイシン処理により内因性p53を活性させた系を用いてlincRNAの発現をPCRで解析した．その結果，22のlincRNAがp53ファミリーにより発現誘導されることが判明した．更に，lincRNAに対するプローブを一部搭載したAgilent社のマイクロアレイを用いて同様の解析を行ったところ4つのlincRNAの発現上昇が認められたが，このうち3つは先の解析と重複しており，合計で23のユニークなp53標的lincRNAが同定された．これらのlincRNAのp53結合部位配列を用いたレポーターアッセイを行ったところ，p53ファミリーの過剰発現およびアドリアマイシン処理により転写活性の上昇が認められた．また，これらのp53結合配列の一部はヒトとマウスの間で保存されていることが判明した．これらの結果から，複数のlincRNAがp53ファミリーの標的となっていることが明らかとなった．
今後は，これらのlincRNAの過剰発現やノックダウンを行い，機能解析を進めていく予定である．
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
p53標的候補のlincRNAについて，p53による発現誘導が確認されるものが複数同定されており，今後，計画通り機能解析に進む予定であるため．
|
| Strategy for Future Research Activity |
lincRNAは，蛋白同様の方法での過剰発現やノックダウンが難しい場合があり，その点を工夫しつつ研究を進めていく．
|
| Causes of Carryover |
研究の進展状況により，使用額が予定額を下回ったため．
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度の継続研究において繰り込んで，使用する．
|
Research Products
(8 results)
-
-
-
-
[Journal Article] Mesenchymal stem cells cancel azoxymethane-induced tumor initiation.2014
Author(s)
Nasuno M, Arimura Y, Nagaishi K, Isshiki H, Onodera K, Nakagaki S, Watanabe S, Idogawa M, Yamashita K, Naishiro Y, Adachi Y, Suzuki H, Fujimiya M, Imai K, Shinomura Y.
-
Journal Title
Stem Cells
Volume: 32
Pages: 913-25
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
[Journal Article] Conditioned mesenchymal stem cells produce pleiotropic gut trophic factors.2014
Author(s)
Watanabe S, Arimura Y, Nagaishi K, Isshiki H, Onodera K, Nasuno M, Yamashita K, Idogawa M, Naishiro Y, Murata M, Adachi Y, Fujimiya M, Imai K, Shinomura Y.
-
Journal Title
Journal of Gastroenterology
Volume: 49
Pages: 270-82
DOI
Peer Reviewed
-
-
-
