2015 Fiscal Year Research-status Report
p53標的大型介在性非コードRNAの同定と機能解析による消化器発癌機構の解明
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25460929
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| Research Institution | Sapporo Medical University |
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Principal Investigator |
井戸川 雅史 札幌医科大学, 医学部, 講師 (00404749)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | lincRNA / p53 / 癌 / アポトーシス / non-coding RNA / lncRNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
In silico p53結合配列解析とクロマチン免疫沈降産物の次世代シーケンサー解析（ChIP-seq）により絞り込まれたゲノム上のp53結合領域近傍に存在する約150のlincRNA（大型遺伝子介在非コードRNA，lincRNA）の内，22のlincRNAがp53ファミリーにより発現誘導され，これらのlincRNAのp53結合部位配列を用いたレポーターアッセイを行ったところp53活性化により転写活性の上昇が認められた．これらの結果から，複数のlincRNAがp53ファミリーの標的となっていることが明らかとなった．
これらのlincRNAの中で，３つのp53ファミリーすべてで強く発現誘導が認められる3つのlincRNAについて肝癌細胞Hep3Bおよび大腸癌細胞DLD1においてsiRNAを用いたノックダウンを行い，アデノウイルスによりp53導入時のアポトーシス誘導能をフローサイトメトリー，Capspase-3活性の定量およびウエスタンブロットによるPARP-1の断片化を用いて測定した．その結果，２つのlincRNAではそのノックダウンによりp53によるアポトーシス誘導が減弱した一方，もう１つのlincRNAではアポトーシスの増強が認められた．更にp53正常型である大腸癌細胞RKOおよび骨肉腫細胞U2OSにおいてNutlin-3a処理により内因性p53を活性化した系においても，同様の結果が得られた．
これらのlincRNAがどのように機能してp53誘導アポトーシスに影響を与えているのかを調べるため，マイクロアレイを用いて網羅的な発現データを取得し，現在，得られたデータの解析を進めているところである．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
これまで計画通り順調に研究を進めていたが，研究計画の最終項目であるp53標的lincRNAの機能解析に少し時間を要している．このため補助事業期間延長の申請を行い，残りの解析を進めているところである．
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| Strategy for Future Research Activity |
lincRNAノックダウン時のマイクロアレイによる網羅的発現データの解析を速やかに行い，その機能について明らかにしていく．
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| Causes of Carryover |
研究計画最終項目であるp53標的lincRNAの機能解析に少し時間を要しており，研究計画延長の申請を行ったため．
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
p53標的lincRNAの機能解析を引き続き行う．
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[Journal Article] Contextual niche signals towards colorectal tumor progression by mesenchymal stem cell in the mouse xenograft model.2015
Author(s)
Nakagaki S, Arimura Y, Nagaishi K, Isshiki H, Nasuno M, Watanabe S, Idogawa M, Yamashita K, Naishiro Y, Adachi Y, Suzuki H, Fujimiya M, Imai K, Shinomura Y.
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Journal Title
Journal of Gastoroenterology
Volume: 50
Pages: 962-74
DOI
Peer Reviewed
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