2016 Fiscal Year Annual Research Report
Functional analysis of large intergenic non-coding RNAs regulated by p53 in cancers of digestive organs
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25460929
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| Research Institution | Sapporo Medical University |
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Principal Investigator |
井戸川 雅史 札幌医科大学, 医学部, 講師 (00404749)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | p53 / lincRNA / 転写 / アポトーシス / 癌 / ChIP-seq / lncRNA / non-coding RNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
In silico p53結合配列解析とクロマチン免疫沈降産物の次世代シーケンサー解析（ChIP-seq）により絞り込まれたゲノム上のp53結合領域近傍に存在する約150のlincRNA（大型遺伝子介在非コードRNA）の内，22のlincRNAがp53ファミリーにより発現誘導され，これらのlincRNAのp53結合部位配列を用いたレポーターアッセイを行ったところp53活性化により転写活性の上昇が認められた．これらの結果から，複数のlincRNAがp53ファミリーの標的となっていることが明らかとなった．
これらのlincRNAの中で，３つのp53ファミリーすべてで強く発現誘導が認められる3つのlincRNAについて肝癌細胞Hep3Bおよび大腸癌細胞DLD1においてsiRNAを用いたノックダウンを行い，アデノウイルスによりp53導入時のアポトーシス誘導能をフローサイトメトリー，Capspase-3活性の定量およびウエスタンブロットによるPARP-1の断片化を用いて測定した．その結果，２つのlincRNAではそのノックダウンによりp53によるアポトーシス誘導が減弱した一方，もう１つのlincRNAではアポトーシスの増強が認められた．更にp53正常型である大腸癌細胞RKOおよび骨肉腫細胞U2OSにおいてnutlin-3a処理により内因性p53を活性化した系においても，同様の結果が得られた．
これらのlincRNAがどのように機能してp53誘導アポトーシスに影響を与えているのかを調べるため，lincRNAをノックダウンしnutlin-3a処理したHep3B細胞において，マイクロアレイを用いて網羅的な発現解析を行ったところ，nutlin-3aによるp53活性化で発現がlincRNA依存的に誘導される遺伝子クラスターが見出された．
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