2014 Fiscal Year Research-status Report
胃内細菌叢をターゲットとした胃癌の予防・早期発見法の開発
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25460932
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| Research Institution | Osaka City University |
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Principal Investigator |
渡邉 俊雄 大阪市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (50336773)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤原 靖弘 大阪市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (40285292)
谷川 徹也 大阪市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (70423879)
富永 和作 大阪市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (80336768)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 胃細菌叢 / 胃がん / 次世代シークエンサー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
１．平成２５年度においては胃内フローラ解析には、Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism (T-RFLP)法を用いて行い、ヒト胃ではLactobacilalles, BacteroidesおよびPrevotellaが主たる細菌種であることを見出した。しかし、T-RFLP法では得られる細菌種の情報が限定的であると判断し、平成２６年度からは詳細で、大量の細菌情報が得られる次世代シークエンサーを用いた細菌１６S ｒRNA遺伝子配列解析に変更した。
２．内視鏡下胃粘膜生検組織を用いた１６S rRNA遺伝子解析を開始した。至適条件設定が完了後は、約９割の検体でPCRによる増幅が可能になった。次世代シークエンサーでの解析の結果、約４０種の細菌が存在が明らかになった。患者がHelicobacter pyloriに感染している場合には約９０％が本菌であったが、その他菌量が多い細菌としてはArthrobacter davidanieli, Prevotella melaninogenica, Ralstonia pickettii, Brevundimonas sp. BAL3, Streptococcus oralis, Granulicatella para-adiacens, Fusobacterium sp. 1_1_41FAA, Streptococcus sp. oral strain T1-E5, Gemella sanguinisなどが同定された。
３．マウスのH. pylori感染モデルを作成し、経時的な胃炎の悪化および菌量の変化、サイトカインの発現動態を確認した。現在、病理組織学的な検討を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
一部の検討（マウスでの感染実験）を除いて、当初の予定通り概ね進んでいる。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成２７年度は以下の検討を行う。
１．次世代シークエンサーを用いた各種胃病態に関連する細菌種の同定。平成２５年度および２６年度に内視鏡下胃粘膜生検で採取した検体を用いて各種胃病態において特異的に変化する細菌種を、次世代シークエンサーを用いた細菌１６S ｒRNA遺伝子配列解析にて同定する。すなわち、正常胃群と高度萎縮性胃炎群、H. pyloriの除菌前後、胃がん発症群と非発症群、さらには除菌後胃がん発症群と胃がん非発症群などのフローラを比較する。また、我々は胃粘膜組織と同時に胃液を採取しており、胃液のフローラ解析が可能か否かを追加検討し、可能な場合には胃液と胃粘膜における細菌種を比較検討する。
２．マウスH. pylori胃炎モデルあるいは胃がん発症モデルの胃粘膜を採取して、同様に次世代シークエンサーを用いた検討を行い、ヒト検体で得られた結果との異同を評価する。
３．上記検討１で特異的な細菌種が同定された場合には、検証実験として、当該細菌を入手後にH. pylori感染マウスに菌体培養液を投与して、胃炎や発がんに影響を与えるか否かの検討を行い、胃細菌叢と胃炎ならびに発がん、あるいは除菌後発がんとの関連を明らかにする。
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