炎症性腸疾患腸管粘膜におけるsmad7発現亢進のメカニズムと新規治療法の開発

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25460952
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 中村 和彦 九州大学, 大学病院, 助教 (00274449)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 伊原 栄吉 九州大学, 大学病院, 助教 (80612390)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: 炎症性腸疾患 / smad7 / TGF-beta / proinflammatory cytokine

Outline of Annual Research Achievements

Balb/cマウスより脾臓を摘出し、単核球を分離した。マウスCD4+ T細胞分離キットでCD4+ T細胞を分離した。CD4+ T細胞を固相化した抗CD3抗体と可溶性抗CD28抗体で刺激、至適濃度のIL-1β、IL-6、IFN-γ、TNF-α、TGF-βを添加し、1時間後、5時間後に細胞を採取しlysateを作成した。LysateをSDS-PAGEで電気泳動し、メンブレンに転写した。抗マウスsmad7抗体でウエスターンブロットを行い、smad7蛋白の発現レベルを解析した。内因性コントロールとしてβ-actinを用いた。
Smad7発現レベルはサイトカイン添加1時間後、コントロールとの比較で、IL-1β、IL-6、IFN-γ、TNF-α、TGF-βの添加により、それぞれ21.4％、90.2％、32.4％、60.3％、108.8％、サイトカイン添加5時間後、それぞれ27.6％、93.4％、28.0％、13.5％、139.6％となり、IL-1β、IFN-γ、TNF-αによりsmad7の著明な発現抑制が認められるとともに、TGF-βによりsmad7発現亢進が認められた。
以上より、IL-1β、IFN-γ、TNF-αなどのproinflammatory cytokineがsmad7発現抑制因子、TGF-βがsmad7発現促進因子である事が示された。Proinflammatory cytokineのシグナルが入る際に、regulatory cytokineのシグナルが伝達されやすいように制御されていると考えられ、生体の恒常性を維持するメカニズムと考えられた。また、TGF-βによる制御が長期間持続すると、smad7の発現が亢進し、TGF-β受容体シグナルが抑制されると考えられた。