がん・骨髄クロストークの可視化による腫瘍血管の異常性検出と、治療抵抗性の評価系

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25461029
• Research Institution: Center for Clinical and Biomedical Research, Sapporo Higashi Tokushukai Hospital
• Principal Investigator: 水上 裕輔 医療法人徳洲会札幌東徳洲会病院付属臨床研究センター, 臨床生体情報解析部, 部門長 (30400089)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 蘆田 知史 医療法人徳洲会札幌東徳洲会病院付属臨床研究センター, IBD研究部, 研究員 (50261409) ; 盛一 健太郎 旭川医科大学, 医学部, 講師 (70455715) ; 井内 康之 医療法人徳洲会札幌東徳洲会病院付属臨床研究センター, その他部局等, 研究員 (90640615) [Withdrawn]
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: 膵癌 / 低侵襲診断

Outline of Annual Research Achievements

本課題では、担がん個体の血液中に含まれる間質系前駆細胞を利用したがんの診断・モニタリングシステムを計画したが、むしろ血液中の核酸に直接その原因を見いだすことがより近道であると考えて計画の一部を変更した。
平成27年度は、膵癌およびその前駆病変のひとつである膵管内乳頭粘液性腫瘍（IPMN）患者を対象とし、血漿中の変異型KRASの検出に関するプロトコール作成を行った。健常人の血漿中には160-180bp程度に断片化された遊離核酸（cell free DNA; cfDNA）が存在するが、担癌患者ではこれがやや高濃度に、また350bp以上のDNA断片も時に観察された。これらのDNA断片をデジタルPCRで増幅し、変異配列に対する特異性の高いプローブにより変異DNAを選択的に検出することを試みた。プローブの特異性を担保するためにLNAプローブを用いたところ、KRAS Exon2の増幅産物からcodon 12および13のhot spot変異を極めて高い精度で検出し、定量的しうる事が確認できた。また、IPMN患者では同様にGNAS遺伝子のcodon201変異も検出された。治癒切除が可能であった症例において、血漿cfDNAと原発巣FFPE材料から得られる遺伝子変異の解析結果が一致するかについて検証したが、KRAS（codon 12, 13）およびGNAS（codon 201）が血漿中に検出率は5割以下であった。技術的な問題点として、血漿検体におけるDNAコピー数が3,000 copy/mL程度と限られるため、デジタルPCRの検出限界での低コピー異常を検出するためには、採血量を増やすか、あるいはcfDNAの増幅などの工夫が必要と考えられた。

Research Products

• [Journal Article] Tracking the clonal evolution of adenosquamous carcinoma, a rare variant of intraductal papillary mucinous neoplasm of the pancreas. (2016)
  • Author(s): Matsuzaka S, Karasaki H, Ono Y, Ogata M, Oikawa K, Tamakawa S, Chiba S, Muraki M, Yokochi T, Funakoshi H, Kono T, Nagashima K, Mizukami Y.
  • Journal Title: Pancreas Volume: xx Pages: xx-xx
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The protein expression level of Gli2 is a feasible marker of ligand-dependent hedgehog activation in pancreatic neoplasms. (2016)
  • Author(s): Sugiyama Y, Sasajima J, Mizukami Y, Koizumi K, Kawamoto T, Karasaki H, Yusuke Ono, Tanabe H, Fujiya M, Kohgo Y.
  • Journal Title: Pol J Pathol Volume: xx Pages: xx-xx
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A Rare Case of Epidermoid Cyst in the Pancreatic Tail Invaginated from the Splenic Hilum: Long-term Alteration in Imaging Findings. (2016)
  • Author(s): Sugiyama Y, Kawamoto T, Sasajima J, Koizumi K, Karasaki H, Mizukami Y.
  • Journal Title: Internal Medicine Volume: xx Pages: xx-xx
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Plasma DNA genotyping using digital PCR for early detection of pancreatic neoplasm (2015)
  • Author(s): Mizukami Y, Ono Y, Karasaki H, Ogata M, Koizumi K, Ando K, Yokochi T, Yamada M, Kono T, Nagashima K
  • Organizer: 46th Annual Meeting of the American Pancreatic Association
  • Place of Presentation: San Diego
  • Year and Date: 2015-11-04 – 2015-11-07
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] 液体生検による膵癌リスク評価 (2015)
  • Author(s): 水上裕輔、真口宏介、小泉一也
  • Organizer: 第23回日本消化器関連学会週間
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-10-08 – 2015-10-11
• [Presentation] Plasma DNA genotyping using digital PCR for early detection of pancreatic cancer (2015)
  • Author(s): Mizukami Y, Ono Y, Karasaki H, Asahara S, Ando K, Shinohara T, Nagashima K
  • Organizer: 第74回日本癌学会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2015-10-08 – 2015-10-10
• [Remarks] 札幌東徳洲会病院付属臨床研究センター
  • URL: http://www.higashi-tokushukai.or.jp/clinical_study/research/detail.php?pid=434583114140