2015 Fiscal Year Annual Research Report
細胞接着分子を標的とした動脈硬化治療戦略開発のための基盤構築
| Project/Area Number |
25461128
|
|---|
| Research Institution | Kobe Pharmaceutical University |
|---|
Principal Investigator |
力武 良行 神戸薬科大学, 薬学部, 教授 (50419488)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
|
| Keywords | 細胞接着分子 / 血管内皮細胞 / シグナル伝達 / 糖鎖修飾 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
最終年度に当たる本年度は、血管内皮細胞における細胞接着分子Necl-4と動脈硬化巣の血管内皮細胞に高発現しているFAM5Cの機能と作用機構を解析した。
Necl-4はヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）の運動と増殖を制御しているが、HUVECを疎に培養した場合は、siRNAを用いてNecl-4をノックダウンしても、血管内皮増殖因子（VEGF）に応答したVEGF受容体の自己リン酸化は抑制されずに、ERKの活性化と細胞増殖は抑制された。VEGFに応答したVEGF受容体は細胞内へ移行（internalization）するが、Necl-4をノックダウンしても、VEGFに応答したVEGF受容体の細胞内移行は影響されなかった。しかし、ERKの上流にあるRafやMEKのリン酸化は抑制された。Raf/MEK/ERKシグナル伝達経路の抑制は、Necl-4と同時にPTPN13をノックダウンしても回復せず、ROCK阻害剤によっても回復しなかった。以上の結果より、疎に培養した場合は、Necl-4はVEGFに応答したVEGF受容体の自己リン酸化と引き続き生じる細胞内移行には影響せずに、Raf/MEK/ERKシグナル伝達経路の活性化と細胞増殖を促進することが明らかになった。
一方、FAM5Cの作用機構を明らかにするため、GFP tagの付いたFAM5Cを恒常的に発現したHEK293細胞を作製した。その細胞溶解液を用いて抗GFP抗体による免疫沈降物を解析し、FAM5CにUDP-glucose:glycoprotein glucosyltransferase (UGGT1)が結合していることを見出した。UGGT1は小胞体でグリコシル化されていない蛋白質に結合し、蛋白質の品質管理を担う酵素である。阻害剤を用いた検討から、FAM5CはN-グリコシル化されて分泌されることが初めて明らかになった。
|
Research Products
(5 results)
