2013 Fiscal Year Research-status Report

慢性炎症性気道疾患における過去喫煙の影響；エピゲノム変化を介した機序の解明

Research Project

Project/Area Number	25461155
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Research Institution	Kyoto University
Principal Investigator	松本久子京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (60359809)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	室繁郎京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (60344454)
Project Period (FY)	2013-04-01 – 2016-03-31
Keywords	エピゲノム解析 / 喫煙喘息 / 気道平滑筋細胞
Research Abstract	平成25年度は継代前、タバコ抽出液曝露後継代した培養ヒト気管支平滑筋細胞(ASM)について、DNA, mRNAを集積し、候補CpG islandについてMethylation Specific qPCR (MSqP)用のprimerを作成し、DNAの一部をバイサルファイト処理、MSqP条件を調整中である。候補CpG islandの筆頭は、樹状細胞を介してTh2系炎症を惹起・維持させるthymic stromal lymphopoietin (TSLP)-promoter領域のCpG islandとした。TSLPの遺伝子多型が、日本人の喘息発症に関わり(Hirota, et al. Nat Genet 2011)、現喫煙・過去喫煙喘息例の誘発喀痰中TSLP濃度がいずれも非喫煙喘息例に比べ有意に高く（Nagasaki, Matsumoto, et al. Clin Exp Allergy 2013）、CpGのメチル化の関与が推察される。バイサルファイト処理後のDNAは脆弱になるため、臨床検体由来DNAのバイサルファイト処理は、全ての候補CpG islandのprimerとMSqPの条件設定ができた段階で一括解析する予定である。また、重症喘息、喫煙喘息、COPD例において、スーパー抗原であるブドウ球菌由来エンテロトキシン(SE)への感作増加が報告されている。我々もSEと喘息コントロール不良、喘息発症年齢、遺伝子多型との有意な関連を認めており（Matsumoto H, et al. Paper in submission）。今年度は、SE曝露後のASMも継代し、epigenome解析を追加する。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 2013年5月にアトピー性皮膚炎罹患児のcord blood由来DNAにおいて、TSLPのpromoter領域CpG islandの脱メチル化が親の喫煙と関連することが報告された(Wang et al. Clin Exp Allergy)。我々の主な関心領域と同じCpG islandの報告であり、臨床検体での有意な結果が期待できる。
Strategy for Future Research Activity	今年度は臨床検体由来DNAのバイサルファイト処理、MSqP解析を行うとともに、SE曝露後のASMも継代し、epigenome解析を追加する。