2013 Fiscal Year Research-status Report
酸化ストレス防御タンパク質ＤＪ－１の肺胞・気管支での機能と呼吸器疾患発症への関与
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25461184
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Toho University |
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Principal Investigator |
平 敬宏 東邦大学, 医学部, 教授 (70197036)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | DJ-1タンパク質 / 酸化ストレス / 慢性閉塞性肺疾患 / 細胞死 / シグナル伝達 |
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| Research Abstract |
申請書の研究計画に従い、以下のように研究を行った。酸化ストレス防御タンパク質ＤＪー１と呼吸器疾患発症の関連を調査するために、ヒト気管支上皮由来細胞Beas2B細胞、ヒト肺胞基底上皮腺癌由来A549細胞で、DJ-1タンパク質発現抑制細胞株、および変異型DJ-1タンパク質強制発現細胞株の作成を実施した。
DJ-1タンパク質発現抑制細胞株は、一過性導入でDJ-1タンパク質産生抑制が確認されたsiRNA発現プラスミドを、２種細胞にTranfection後、プラスミドにコードされた薬剤により細胞を2～4週間選別した。その結果、数株のDJ-1タンパク質産生抑制株が得られた。
同時に、野生型DJ-1タンパク質と神経変性疾患患者などで酸化ストレス防御機能を喪失していることが認められた変異型DJ-1タンパク質遺伝子のN末端にFLAGまたはHAタグを融合させた発現プラスミドを作成し、発現抑制細胞株作成と同様に細胞にTransfecton、細胞の選別を行い、恒常的野生型、及び変異型DJ-1タンパク質発現細胞を樹立した。
現在、これらの細胞株について再現性、細胞株間の差異を検討しているが、発現抑制株、変異型発現株では総じて増殖抑制および酸化ストレス感受性増加によると示唆される細胞死促進作用が認められている。詳細な解析をさらにすすめているが、これらの増殖抑制、細胞死促進は、DJ-1タンパク質の細胞増殖、酸化ストレス防御機能への重要性をますます示すものと考えられる。今後、樹立した細胞株を用い、タバコ煙曝露、タバコ煙抽出液、各種酸化ストレス誘導薬物添加による細胞の挙動を解析し、喫煙などの酸化ストレスが誘発する慢性閉塞性肺疾患(COPD)などの発症機構とDJ-1タンパク質の関与の解析を進める。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究代表者が、平成25年4月より所属先が変更になり当初は研究が遅滞した。
そのため、タバコ煙曝露などストレス負荷の実験は、現在予備的調査段階である。
しかしながら、概ね研究計画に従った進展を行うことが出来た。
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| Strategy for Future Research Activity |
以下の研究計画を推進する。
１、樹立細胞株を用いた酸化ストレス感受性の検討
２、樹立細胞間での遺伝子発現の違いをDNAチップで検討し、転写因子として機能するDJ-1タンパク質の標的遺伝子の探索と、標的遺伝子産物の酸化ストレス防御機能との関連を検討する。
３、DJ-1タンパク質が関与するあらたな細胞死誘導機構を検討する。
４、臨床的な肺疾患との関連生を検討する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
研究代表者の移籍により、設備備品費で申請していた分光光度計は新所属先に既に設置されており不要となった。また、旅費も別途より支出し、移籍先研究体制確立のため全額を物品費（消耗品）として支出した。
物品費を予算額ちょうどにすることが困難なため、1587円を翌年度にまわすことになった。
次年度に物品費として使用する。
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