2013 Fiscal Year Research-status Report
肺サーファクタント蛋白質の新たな生体防御機能：抗腫瘍活性と肺病態進展の防御機構
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25461194
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Sapporo Medical University |
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Principal Investigator |
黒木 由夫 札幌医科大学, 医学部, 教授 (70161784)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 肺サーファクタント / SP-D / EGF / EGFR / 肺腺がん |
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| Research Abstract |
平成２５年度は、肺コレクチン，特にSP-Dに焦点を絞って、EGFシグナルへの影響とその機序を調べた。（１）SP-Dは濃度依存性にA549細胞の増殖を抑制し、EGFによるA549細胞の遊走・浸潤を抑制した。SP-Dは濃度依存性にA549細胞、H441細胞、EGFR安定発現CHO-K1細胞のEGFRリン酸化、Erkリン酸化、Aktリン酸化を抑制した。（２）SP-DがEGFとEGFRの結合に与える影響を調べたところ、SP-Dは濃度依存性に125 I- EGFとA549細胞のEGFRとの結合飽和度を低下させた。（３）A549細胞由来EGFRの糖鎖解析とSP-Dとの結合解析では、メンブレン上のA549細胞由来EGFRにSP-Dが直接結合した。さらに、メンブレン上のsEGFRにSP-Dは結合したが、N型糖鎖を切断したsEGFRには結合しなかった。ELISAにおいてもSP-DとsEGFRとの結合が確認され、EDTAとマンノースによって両者の結合が阻害された。またN型糖鎖を切断したsEGFRにはSP-Dは結合しなかった。表面プラズモン共鳴センサーにおいてもsEGFRとSP-Dの結合が確認され、KD = 3.2 ×10-8 Mであった。EDTAとマンノースにより両者の結合が阻害され、N型糖鎖を切断したsEGFRにはSP-Dは結合しなかった。（４）CHO-K1細胞由来EGFRの糖鎖を解析したところ、sEGFRのドメインIII (EGFの結合部位) に存在する328番目と337番目のアスパラギン残基に高マンノース型のN型糖鎖が存在することがわかった。
平成２５年度研究によって、SP-DはEGFRの細胞外ドメインに存在する高マンノース型のN型糖鎖に糖鎖認識領域を介して結合し、EGFRのリガンド結合を阻害することにより、EGF シグナルを抑制し、抗腫瘍作用をもたらすと考えられる。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
肺コレクチン 、特にSP-Dが肺腺がん細胞の増殖、遊走、浸潤を抑制することを明らかにした。その機序として、SP-DとEGFRとの結合を示し、 SP－DのリガンドとしてEGFRの糖鎖構造を明らかにした。SP-Dに関しては、予想以上の進展であった。可溶型受容体sEGFRの作製と精製に時間を要したこともあり、SP-Aについては、現在検討中である。コレクチンによるMMP活性制御については、SP-AとSP-DともにマクロファージのMMP活性を抑制する予備実験結果を得ているが、再度確認中である。
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| Strategy for Future Research Activity |
コレクチンのうち、SP-Aの抗腫瘍活性とその機序については、SP-Dと同様にレクチン活性に由来するものかどうか、EGFシグナルを抑制するものによるかどうかを明らかにしたい。MMP活性は肺気腫進展に関与しているので、肺コレクチンによるMMP制御の有無を確定し、肺気腫進展への憎悪因子である喫煙に暴露した際のサーファクタントとその成分の機能ををMMP活性を指標に調べることにより、抗気腫化因子としてのサーファクタントの新たな機能を見いだしたい。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
出張旅費と謝金を他助成金で支払ったため、125,031円の残額がでた。
次年度は、学会出張を予定。一部、消耗品費として使用予定である。
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[Journal Article] Surfactant protein D suppresses lung cancer progression by downregulation of epidermal growth factor signaling.2015
Author(s)
Hasegawa Y, Takahashi M, Ariki S, Asakawa D, Tajiri M, Wada Y, Yamaguchi Y, Nishitani C, Takamiya R, Saito A, Uehara Y, Hashimoto J, Kurimura Y, Takahashi H, Kuroki Y
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Journal Title
Oncogene
Volume: 34
Pages: 838-845
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Suppression of heregulin beta signaling by the single N-glycan deletion mutant of soluble ErbB3 protein.2013
Author(s)
Takahashi M, Hasegawa Y, Ikeda Y, Wada Y, Tajiri M, Ariki S, Takamiya R, Nishitani C, Araki M, Yamaguchi Y, Taniguchi N, Kuroki Y.
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Journal Title
J Biol Chem
Volume: 288
Pages: 32910-32921
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Surfactant proteins A and D suppress epidermal growth factor signaling through interactions with N-glycans of receptors.2013
Author(s)
Hasegawa Y, Takahashi M, Ariki S, Asakawa D, Tajiri M, Wada Y, Takamiya R, Uehara Y, Hashimoto J, Takahashi H, Kuroki Y.
Organizer
18th Congress of Asian Pacific Society of Respirology
Place of Presentation
Yokohama
Year and Date
20131111-20131114
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