モノアミンメチル化酵素を標的とした新たな慢性腎臓病進展因子の解明

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 25461218
• Research Institution: Shiga University of Medical Science
• Principal Investigator: 宇津 貴 滋賀医科大学, 医学部, 准教授 (20422884)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: 慢性腎臓病 / 肥満 / 加齢 / 脂肪酸毒性 / モノアミンメチル化酵素

Outline of Annual Research Achievements

(1)Indolethylamine N-methyltransferase(Inmt) の機能解析
培養尿細管細胞を用いてInmtが尿細管保護的に働いているか否かの検討を行った。パルミチン酸刺激によるアポトーシスを指標に評価したところ、SiRNAでInmt発現を抑制すればアポトーシスが亢進し、アデノウイルスを用いてInmtを過剰発現アポトーシスが抑制されることを確認し、Inmtは尿細管に対し保護的に働いていることを明らかにした。
(２)Inmt欠損マウスの作成とその機能解析
Inmtはモノアミンに対するメチル化酵素でありトリプトファン代謝物であるセロトニン等の代謝に影響を与える。Inmtを全身で欠損させたマウスで確認したところ、セロトニンの尿中排泄が、コントロールマウスに比し、減少していた。さらに加齢や高脂肪食肥満によって尿中セロトニンが減少した。Inmtを全身で欠損させたマウスにおいて、腎機能、腎組織の検討を行ったが、現在までのところコントロールマウスとの間に明らかな際は認められていない。
(３)近位尿細管特異的Inmt欠損マウスの作成とその機能解析
Inmt-floxマウスを作成し、タモキシフェン誘導型近位尿細管特異的Cre発現マウスとの交配により作製に成功した。現在、尿細管にたいするパルミチン酸刺激と同様の減少が期待される腹腔内脂肪酸結合アルブミン負荷を行い、腎機能、腎組織および腎内の遺伝子発現変化を検討を行っている。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

当初の目的であった近位尿細管特異的Inmt欠損マウスの作成とその機能解析が、おおむね順調に開始された。今後、このマウスを用いた腹腔内脂肪酸結合アルブミン負荷を行い、腎機能、腎組織および腎内の遺伝子発現変化を行っているところであるが、実験動物の準備が整い次第、糖尿病モデルによる検討も予定している。ただし、マウスInmtに対する特異抗体がうまく反応しておらず、組織染色は行えていない。

Strategy for Future Research Activity

近位尿細管特異的Inmt欠損マウスの解析を進め、Inmtが生体内で腎保護効果を有するか否かを確認する。有意な効果が確認された場合は、ヒト検体におけるInmtの検討を開始するととも、セロトニン以外のInmt標的分子を同定することを予定している。

Causes of Carryover

本研究は３年間の計画で行っているため、次年度も予定通り研究を継続する。

Expenditure Plan for Carryover Budget

近位尿細管特異的Inmt欠損マウスの解析を進めるため、動物の飼育費用および研究試薬の購入を予定している。また、研究成果の公表にも使用する。