2013 Fiscal Year Research-status Report
Dent病発症の分子メカニズムと腎障害進行機序の解析
| Project/Area Number |
25461242
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
|
| Research Institution | The University of Tokyo |
|---|
Principal Investigator |
関 常司 東京大学, 医学部附属病院, 講師 (30206619)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
堀田 晶子 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (20534895)
山田 秀臣 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (60396752)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
|
| Keywords | CLC5 / Dent病 |
|---|
| Research Abstract |
Dent病はCl輸送体CLC5またはOCRL1遺伝子の変異により小分子蛋白尿、くる病、進行性の腎障害などの近位尿細管機能障害を呈するが、その発症機序には不明の点が多い。特に、2Cl/H交換輸送体であるCLC5の変異がエンドサイトーシス異常を引き起こすメカニズムは解決されていない。今回典型的なDent病症例からCLC5のゲーティング部位の変異E211Qが初めて同定されたので、人為的変異体E211Aと比較しつつ機能解析を行った。アフリカツメカエル卵母細胞発現系で野生型CLC5は陽性電位域でのみ強い外向き整流性を示す電流を発現させた。これに対して、E211AおよびE211Q変異体は全電位域に渡り直線的な電流を呈した。また細胞外溶液のpHを低下させると野生型CLC5の電流は有意に抑制されたが、E211AおよびE211Q電流は変化しなかった。さらにpH感受性微小電極を用いて細胞膜近傍のpH測定実験を行ったところ、野生型CLC5を発現した卵母細胞では脱分極刺激パルスにより細胞外局所pHが大きく低下した。しかし、E211AおよびE211Q変異体を発現した卵母細胞では同様のpH変化を全く認めなかった。一方、HEK293培養細胞に野生型および変異CLC5を発現させ細胞内酸負荷からのNa非依存性の細胞内pH回復過程を比較検討した。全てのCLC5コンストラクトの遺伝子導入はH-ATPase活性を増強したが、その増強作用は野生型が最大であった。以上よりE211Q変異はCLC5のCl/H交換機能を喪失させることが確認され、その結果近位尿細管H-ATPaseの最大活性の発現が障害されることが示唆された。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
CLC5のゲーティング部位の変異E211QがCLC5のCl/H交換機能を喪失させることが確認でき、またH-ATPaseに対する作用もある程度明らかにできたため。達成度は良好と考える。
|
| Strategy for Future Research Activity |
野生型および変異型CLC5遺伝子によるH-ATPase活性増強のメカニズムについて、蛋白発現や細胞内局在の変化などが関与するか、検討する予定である。また野生型および変異型CLC5によるエンドゾーム内pHの変化についても詳細に検討し、E211Q変異によるDent病発症機序を明らかにする予定である。
|
| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
物品の経費が予想より少なく済んだため
物品および旅費、その他の経費に使用する予定
|
-
-
-
[Presentation] Loss of 2Cl/H exchange function of CLC-5 causes Dent’s disease2013
Author(s)
Nobuhiko Sato, Hideomi Yamada, Osamu Yamazaki, Shoko Horita, Masashi Suzuki, Motonobu Nakamura, Yoshitsugu Kaku, Daisuke Yamamoto, Akira Ashida, Takashi Sekine, George Seki
Organizer
Annual Meeting of American Society of Nephrology
Place of Presentation
Atlanta, USA
Year and Date
20131107-20131107
-
-
-
-
