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2014 Fiscal Year Research-status Report

p27によるマクロファージ増殖制御の糖尿病・動脈硬化における生理学的意義の解明

Research Project

Project/Area Number 25461361
Research InstitutionKumamoto University

Principal Investigator

瀬ノ口 隆文  熊本大学, 生命科学研究部, 助教 (00530320)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 松村 剛  熊本大学, 医学部附属病院, 講師 (20398192)
Project Period (FY) 2013-04-01 – 2016-03-31
Keywords脂肪浸潤マクロファージ / インスリン抵抗性 / 動脈硬化
Outline of Annual Research Achievements

【目的】動脈硬化病変や脂肪組織における組織浸潤マクロファージの増殖が、動脈硬化および耐糖能異常の発症・進展に及ぼす生理学的意義を、マクロファージ特異的増殖抑制マウスを用いて検討した。
【方法】スカベンジャー受容体遺伝子プロモーター制御下にサイクリン依存性キナーゼ阻害因子 p27kipを発現するマクロファージ特異的増殖抑制マウス(mac-p27Tg)を作成した。①mac-p27Tgへの高脂肪食負荷群、mac-p27Tgとob/obマウスとの交配群(ob/ob×mac-p27Tg)において、耐糖能に対するマクロファージ増殖の影響を検討した。ipGTT、ipITTを行い耐糖能を評価した。精巣上体周囲脂肪組織の組織学的変化、炎症性サイトカインの発現を検討した。②ApoE-/-×mac-p27Tgにおいて、動脈硬化病変の発症・進展に対するマクロファージ増殖の影響を検討した。大動脈弁輪部切片のプラーク面積を計測した。レーザーマイクロダイセクションで回収した動脈硬化病変組織におけるmRNA発現を検討した。
【結果】①ipGTTにおいて、マクロファージ増殖抑制による血糖上昇の抑制を認めた。ipITTでは、HFD mac-p27Tg群、ob/ob×mac-p27Tg群共に有意なインスリン抵抗性の改善を認めた。脂肪組織では、HFD mac-p27Tgの浸潤マクロファージ及びCrown-like structure形成の減少、TNF-α、IL-6 mRNA発現の減少を認めた。②ApoE-/-×mac-p27Tgにおける大動脈弁輪部切片のプラーク面積は有意に減少していた。プラークにおけるIba-1、Ki67陽性の増殖マクロファージはApoE-/-×mac-p27Tg群で減少し、動脈硬化病変部におけるCD68、IL-6、MCP-1、IL-1βmRNA発現は減少を認めた。【結論】マクロファージ特異的増殖抑制マウスにて、①インスリン抵抗性の改善、②動脈硬化病変部の炎症性サイトカイン抑制、プラーク形成の抑制を認めた。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

マクロファージ特異的human p27kipトランスジェニックマウス(mac-p27Tg)を作成した。本マウスは、マクロファージ特異的にp27kipを発現することで分化を遂げたマクロファージの増殖を特異的に抑制する。動脈硬化病変形成に対するマクロファージ増殖の意義の検討を行うために、動脈硬化モデルマウスであるApoE欠損マウスとの交配を行い、得られたマウスにおける動脈硬化病変の発症、進展を検討した。また、マクロファージ増殖の耐糖能への影響を①mac-p27Tgに高脂肪食負荷を行う系、②mac-p27Tgと肥満糖尿病モデルマウスであるob/obマウスとの交配を行う系において検討した。これらの動物実験は軌道に乗り、科学的解析を行うに十分な個体数を得られており、動脈硬化病変や脂肪組織における遺伝子発現の検討に至っている。また、糖代謝への影響の検討においては、脂肪組織のみならず、肝臓、膵島へのマクロファージ浸潤と増殖の意義についての検討を開始した。個体としての表現型の差異は確認できたものの、特にin vitroの実験系での細胞および分子レベルにおける、動脈硬化、耐糖能異常の発症・進展におけるマクロファージ増殖の意義、またマクロファージ増殖に関与する分子の同定とその生理的意義の解明に至るには十分な検討を行えていないことから「やや遅れている」と判断する。

Strategy for Future Research Activity

In vivoの解析では、これまでマクロファージ特異的p27発現マウスを用いた検討であったが、現在さらにマクロファージ特異的Tet-onシステムを用いた系を構築しており、p27発現の時間的・空間的制御によりマクロファージ増殖の調節を行うことで、マクロファージ増殖の病態への関与をさらに詳細に検討することができると考える。本システムにより、これまで当教室が提唱してきた、スタチンやその他の薬剤によるマクロファージ増殖抑制を介した抗動脈硬化作用を明らかにし得ると考える。糖代謝に対する組織マクロファージ増殖の関与については、おもに脂肪組織、肝臓の組織マクロファージにおいてFlow cytometoryを用いた解析を行い、増殖とマクロファージ極性(M1/M2)の関与、浸潤マクロファージと常在マクロファージの増殖能とそれらの病態への関与を明らかにすることができると考えている。さらに、In vitroの実験系では引き続き動脈硬化、耐糖能異常の発症・進展におけるマクロファージ増殖の意義の解明をめざし、マクロファージ増殖に関与する分子の同定とその作用機序の検討を行っていきたい。

Causes of Carryover

当初の研究計画に従いほぼ予定通りに研究を遂行し、次年度使用額3124円を残すのみとなった。

Expenditure Plan for Carryover Budget

研究消耗品の費用の一部として使用予定。

  • Research Products

    (9 results)

All 2015 2014

All Journal Article (2 results) Presentation (7 results)

  • [Journal Article] Statins meditate anti-atherosclerotic action in smooth muscle cells by peroxisome proliferator-activated receptor-γ activation.2015

    • Author(s)
      Fukuda K, Matsumura T, Senokuchi T, Ishii N, Kinoshita H, Yamada S, Murakami S, Nakao S, Motoshima H, Kondo T, Kukidome D, Kawasaki S, Kawada T, Nishikawa T, Araki E.
    • Journal Title

      Biochem Biophys Res Commun.

      Volume: 457 Pages: 23-30

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2014.12.063

  • [Journal Article] SIRT7 controls hepatic lipid metabolism by regulating the ubiquitin-proteasome pathway.2014

    • Author(s)
      Yoshizawa T, Karim MF, Sato Y, Senokuchi T, Miyata K, Fukuda T, Go C, Tasaki M, Uchimura K, Kadomatsu T, Tian Z, Smolka C, Sawa T, Takeya M, Tomizawa K, Ando Y, Araki E, Akaike T, Braun T, Oike Y, Bober E, Yamagata K.
    • Journal Title

      Cell Metab.

      Volume: 19 Pages: 712-21

    • DOI

      10.1016/j.cmet.2014.03.006

  • [Presentation] Impacts of Local Macrophage Proliferation on Atherosclerotic Plaque Progression and Obesity-associated Adipose Tissue Inflammation.2015

    • Author(s)
      Sarie Yama, Takafumi Senokuchi, Takeshi Matsumura, Takeshi Nishikawa, Eiichi Araki
    • Organizer
      75th Scientific Sessions, American Diabetes Association
    • Place of Presentation
      Boston, U.S.A.
    • Year and Date
      2015-06-05 – 2015-06-09
  • [Presentation] インスリン抵抗性及び動脈硬化の発症・進展に対する組織浸潤マクロファージ増殖の生理学的意義の検討2015

    • Author(s)
      山田沙梨恵, 瀬ノ口隆文, 松村 剛, 本島寛之, 石井規夫, 木下博之, 福田一起, 西川武志, 荒木栄一
    • Organizer
      第58回日本糖尿病学会年次学術集会
    • Place of Presentation
      下関市
    • Year and Date
      2015-05-21 – 2015-05-24
  • [Presentation] インスリン抵抗性、動脈硬化の発症・進展 における組織浸潤マクロファージ増殖の 生理学的意義の検討2014

    • Author(s)
      瀬ノ口 隆文、山田 沙梨恵、松村 剛、 本島 寛之、西川 武志、荒木 栄一
    • Organizer
      第26回分子糖尿病学シンポジウム
    • Place of Presentation
      高知市
    • Year and Date
      2014-12-06 – 2014-12-06
  • [Presentation] Statin-mediated PPARγ activation in adipocytes may improve glucose tolerance in high fat-fed mice.2014

    • Author(s)
      Takafumi Senokuchi, Takeshi Matsumura, Kazuki Fukuda, Norio Ishii, Hiroyuki Kinoshita, Sarie Yamada, Saiko Murakami, Tatsuya Kondo, Hiroyuki Motoshima, Takeshi Nishikawa, Eiichi Araki
    • Organizer
      6th AASD Scientific Meeting
    • Place of Presentation
      Singapore
    • Year and Date
      2014-09-21 – 2014-09-24
  • [Presentation] Inhibition of Local Macrophage Growth Ameliorates Focal inflammation in the Plaque and Suppresses Atherosclerosis in ApoE-deficient Mice.2014

    • Author(s)
      Takafumi Senokuchi, Sarie Yamada, Emi Negita, Takeshi Matsumura, Takeshi Nishikawa, Eiichi Araki
    • Organizer
      9th Metabolic Syndrome, Type 2 Diabetes and Atherosclerosis Congress
    • Place of Presentation
      Kyoto, Japan
    • Year and Date
      2014-09-12 – 2014-09-13
  • [Presentation] 糖尿病における動脈硬化症進展の体質医学的研究 組織浸潤マクロファージ増殖の意義の検討2014

    • Author(s)
      瀬ノ口 隆文
    • Organizer
      第64回日本体質医学会総会
    • Place of Presentation
      大阪市
    • Year and Date
      2014-09-06 – 2014-09-07
  • [Presentation] 動脈硬化病変形成におけるマクロファージ増殖の病態生理学的意義の検討2014

    • Author(s)
      山田 沙梨恵、瀬ノ口 隆文、松村 剛、本島 寛之、石井 規夫、木下 博之、福田 一起、西川 武志、荒木 栄一
    • Organizer
      第46回日本動脈硬化学会総会・学術集会
    • Place of Presentation
      東京都
    • Year and Date
      2014-07-10 – 2014-07-11

URL: 

Published: 2016-05-27  

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