2014 Fiscal Year Research-status Report
ヘパリン親和性を獲得した新規エリスロポエチンの生物学的特性と臨床応用のための検討
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25461410
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
森山 雅人 新潟大学, 医歯学系, 助教 (30598131)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小澤 拓也 新潟大学, 医歯学系, 助教 (70467075)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | エリスロポエチン / ヘパリン親和性 / ヘパリン結合ドメイン / 造血活性 / 組織保護 / 血管増殖阻害 / 細胞外マトリックス / サイトカイン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
申請者は、赤血球系の造血因子であるエリスロポエチン（EPO）にヘパリン親和性モチーフを導入し、ヘパリン親和性EPO（HEPO）という新規サイトカインの合成に成功している（特願2008-323611）。またHEPOの特性として、EPO活性の保持とヘパリン親和性の獲得を確認している（特願2012-543009、国際出願PCT/JP2009/071095）。
今回の研究では、ヒトHEPO（rhHEPO）の安定発現株（Stable Transfectant）を確立し、その生物学的特性を検討して、①長期作用性造血剤、②組織・血管内皮保護剤、③抗腫瘍剤（血管増殖阻害剤）としての臨床応用に向け、必要な基礎データを固めることを目的とした。そこで初年度から次年度にかけて、安定発現株の作成と大量培養系および蛋白精製系の確立のため、１．ヒト特有の糖鎖構造の重要性を踏まえ、現在のバキュロウイルス・昆虫細胞系からヒト細胞株による発現系を作成すること、２．安定発現株（Stable Transfectant）を樹立すること、３．浮遊細胞培養系を確立し、大量培養を行うこと、４．精製手法を確立し、本新薬の安定生産を確立すること、を計画していた。そのために、過去の研究結果の解析、整理を行い、それをデータベース化し、今後の研究を進める上での方向性の検討と問題点の確認を行った。さらに、新規発現系に移行する前段階の評価として、既存の発現系によるrhHEPPOの培養と生成、測定などを進めてきた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
申請時の研究計画では、初年度から次年度にかけて、安定発現株を作成し、大量培養系および蛋白精製系を確立し、in vitroおよびin vivoの実験を進める予定であった。しかし、平成25年度、26年度ともに臨床業務のエフォート率が申請時に想定していた以上に高くなってしまったため、計画通りに研究を遂行することが出来なかった。申請者は所属診療科における外来診療業務、および入院患者様に対する病棟業務にも従事し、学生講義や実習の担当、カリキュラム委員や共用問題作成などを行いながら、総括医長、外来長などの責務をも担っている。従ってここまでの経過で、蓄積された研究結果の解析、整理と、既存の発現系によるrhHEPOの培養と生成、測定を行うにとどまった。
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| Strategy for Future Research Activity |
（今後の推進方策）当初計画していた実験計画の続きを行う。具体的には、１．rhHEPOとヒト細胞株による発現系への転換と、２．rhHEPOの培養系、精製方法の確立である。さらに併行して、平成26年度以降に実施予定の、１．in vitro造血活性の検討、２．in vitro血管内皮作用の検討、３．in vivo動物モデルによる造血活性および血管内皮保護作用の検討、４．in vivo微小血管障害治療モデル作成のための基礎検討、も進めていく予定である。
（次年度の研究費の使用計画）本研究計画を遂行するには、申請時に記入した研究経費が必須である。EKISAキットなど必要な試薬類の追加の他、in vitroの検討では細胞株や血管新生キット、in vivoにおける実験では各種動物が不可欠である。また研究の推進に必要な学会への参加や情報収集なども行っていく予定である。
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| Causes of Carryover |
申請時の研究計画では、初年度から次年度にかけて、安定発現株を作成し、大量培養系および蛋白精製系を確立し、in vitroおよびin vivoの実験を進める予定であった。しかし、平成25年度、26年度ともに臨床業務のエフォート率が申請時に想定していた以上に高くなってしまったため、計画通りに研究を遂行することが出来なかった。申請者は所属診療科における外来診療業務、および入院患者様に対する病棟業務にも従事し、学生講義や実習の担当、カリキュラム委員や共用問題作成などを行いながら、総括医長、外来長などの責務をも担っている。従ってここまでの経過で、蓄積された研究結果の解析、整理と、既存の発現系によるrhHEPOの培養と生成、測定を行うにとどまった。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
初年度から次年度にかけて計画していた、rhHEPOのヒト細胞株による発現系への転換、培養系、精製方法の確立、in vitro造血活性の検討、in vitro血管内皮作用、造血活性および血管内皮保護作用の検討、などを進めていく予定である。
本研究計画を遂行するには、申請時に記入した研究経費が必須である。EKISAキットなど必要な試薬類の追加の他、in vitroの検討では細胞株や血管新生キット、in vivoにおける実験では各種動物が不可欠である。また研究の推進に必要な学会への参加や情報収集なども行っていく予定である。
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