血友病Ａに対する有効な遺伝子治療法の開発を目指した基礎的検討

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25461460
• Research Institution: Jichi Medical University
• Principal Investigator: 水上 浩明 自治医科大学, 医学部, 教授 (20311938)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: AAVベクター / 血友病 / 遺伝子治療

Outline of Annual Research Achievements

血友病Aの遺伝子治療に向けた基礎的検討として，凝固第Ⅷ因子の遺伝子をAAVベクターに搭載して効率良く発現させることを目指して検討を行った．凝固第Ⅷ因子の遺伝子は全長で約9kbあることから，そのままではAAVベクターに搭載することはできない．解決法としてはBドメインを除いたいわゆるBDDタイプの遺伝子(4.4kb)を用いて単一のベクターを用いる方法と，重鎖と軽鎖を別々のベクターに搭載し，両者を共感染させて発現を期待する方法の２つのアプローチが考えられる．本研究ではこれまでに引き続き，単一のベクターで効果を検討することを優先した．本研究は肝臓への遺伝子導入を図るアプローチであることから，肝臓における効果が期待でき，しかも短いプロモーターを用いることが望ましい．この点を比較検討したところ，BDD型の遺伝子に肝臓特異的なプロモーターを短縮して組み合わせたベクターが好適と考えられ，in vitro のみならずマウスを用いた検討でも凝固第Ⅷ因子の活性が得られた．AAVベクターの作製効率に関しては，ベクター長との関連が大まかに知られており，ベクターの全長が野生型に相当する4.7kbを超えた場合，作製効率が低下する傾向があることが知られている．血友病Ｂに対する遺伝子治療法の開発に際して使用した肝臓への特異性の高いプロモーターを搭載すると5.4kbのベクター長となり，発現効率は良好であるものの，その産生効率は野生型相当の長さを持つものに比べて有意に低下していた．現実に治療法として開発を進めていくためには，より短く，かつ充分な発現が期待できるプロモーターの使用が望ましいものと考えられた．

Research Products

• [Journal Article] Long-term two-photon calcium imaging of neuronal populations with subcellular resolution in adult non-human primates (2015)
  • Author(s): Sadakane, O., Masamizu, Y., Watakabe, A., Terada, S., Ohtsuka, M., Takaji, M., Mizukami, H., Ozawa, K., Kawasaki, H., Matsuzaki, M., Yamamori, T.
  • Journal Title: Cell Reports Volume: 13 Pages: 1989-99
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The angiogenesis regulator vasohibin-1 inhibits ovarian cancer growth and peritoneal dissemination and prolongs host survival. (2015)
  • Author(s): Takahashi, Y., Saga, Y., Koyanagi, T., Takei, Y., Machida, S., Taneichi, A., Mizukami, H., Sato, Y., Matsubara, S., Fujiwara, H.
  • Journal Title: Int J Oncol Volume: 47 Pages: 2057-63
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The Tol2 transposon system mediates the genetic engineering of T-cells with CD19-specific chimeric antigen receptors for B-cell malignancies. (2015)
  • Author(s): Tsukahara, T., Iwase, N., Kawakami, K., Iwasaki, M., Yamamoto, C., Ohmine, K.,Uchibori, R., Teruya, T., Ido, H., Yasushi, S., Urabe, M., Mizukami, H., Kume, A., Nakamura, M., Brentjens, R., Ozawa, K.
  • Journal Title: Gene Ther Volume: 22 Pages: 209-15
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Comparative analyses of adeno-associated viral vector serotypes 1, 2, 5, 8 and 9 in marmoset, mouse and macaque cerebral cortex. (2015)
  • Author(s): Watakabe, A., Ohtsuka, M., Kinoshita, M., Takaji, M., Isa, K., Mizukami, H., Ozawa, K., Isa, T., Yamamori, T.
  • Journal Title: Neurosci Res Volume: 93 Pages: 144-57
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Long-term expression of coagulation factor IX gene transduced by AAV8 into macaques (2015)
  • Author(s): Mizukami H, Ohmori T, Uchibori R, Tsukahara T, Saga, Y, Urabe M, Kume A, Sakata Y, Ozawa K
  • Organizer: 日本血液学会
  • Place of Presentation: 金沢
  • Year and Date: 2015-10-17
• [Presentation] Persistent factor IX expression following AAV8-mediated liver transduction in macaques (2015)
  • Author(s): Mizukami H, Ohmori T, Uchibori R, Tsukahara T, Saga, Y, Urabe M, Kume A, Sakata Y, Ozawa K
  • Organizer: 欧州遺伝子細胞治療学会
  • Place of Presentation: ヘルシンキ
  • Year and Date: 2015-09-17
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Long-term efficacy of factor IX gene expression following AAV8-mediated liver transduction in macaques (2015)
  • Author(s): Mizukami H, Ohmori T, Uchibori R, Tsukahara T, Saga, Y, Urabe M, Kume A, Sakata Y, Ozawa K.
  • Organizer: 日本遺伝子治療学会
  • Place of Presentation: 大阪
  • Year and Date: 2015-07-25
• [Book] J Thromb Haemost (2015)
  • Author(s): Ohmori T, Mizukami H, Ozawa K, Sakata Y. Nishimura S.
  • Total Pages: 10
  • Publisher: Wiley
• [Book] Gene Therapy and Cell Therapy through the Liver: Current Aspects and Future Prospects (Terai S. and Suda T. Eds) (2015)
  • Author(s): Mizukami H, Mimuro J, Ohmori T, Sakata Y, Ozawa K.
  • Total Pages: 15
  • Publisher: Springer