新規蛋白抗原を用いた接合菌症の早期診断法および免疫治療法の開発

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 25461516
• Research Institution: Osaka City University
• Principal Investigator: 掛屋 弘 大阪市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (40398152)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 宮崎 義継 国立感染症研究所, 真菌部, 部長 (00311861) ; 渋谷 和俊 東邦大学, 医学部, 教授 (20196447) ; 河野 茂 長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 客員研究員 (80136647)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: ムーコル症 / 血清診断

Outline of Annual Research Achievements

Ａ．研究目的：ムーコル症（接合菌症）の診断は、病理組織学的検査や真菌培養同定でなされるが、基礎疾患が不良で侵襲的な検査が困難な場合も多い。ムーコル症に特異的な血清診断は実用化しておらず、感度・特異度の高い検査法の開発が期待されている。我々はシグナルシークエンストラップ法を利用し、新規抗原を選定。その後、モノクローナル抗体を開発してムーコル抗原検出キット（ELISA）を作成した。前年度までに候補A抗原はR. oryzae、R. microspores、R. microspores var. rhizopodiformis培養上清中およびそれらの感染マウス血清中からも検出された。さらに感度や特異度を向上させるために検出法の条件を見直した。

Ｂ．研究方法：ELISA法条件の変更：ELISAプレートおよびブロキングバッファー、抗体の希釈濃度を変更して条件を検討。サンプル精製条件の検討：適正な血清濃度を検討した。患者血清による検討：肺真菌症が疑われ、抗真菌薬が投与された症例の血清を使用して、ELISA法により候補A抗原の検出を試みた。

Ｃ．研究結果：ELISA法条件の変更：ELISAプレートおよびブロキングバッファー、抗体の希釈濃度を変更し、候補A抗原を検出する感度を変更することに成功。サンプル精製条件の検討：血清濃度が1～20%の範囲では、測定結果への影響はほとんど認められないことが判明。患者血清による検討：深在性真菌症が疑われ、抗真菌薬が投与された14症例の中で1症例のみが陽性に検出。本症例は、急性リンパ性白血病にて末梢血幹細胞移植を受け、発熱を主訴に来院。右上葉に浸潤影が認められた。広域抗菌薬および抗真菌薬（CPFG）にて治療が開始されるも改善傾向を認めず、抗真菌薬をCPFGよりL-AMBへ変更し、改善が認められた。喀痰よりムーコル属が検出され、肺ムーコル症と診断した。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

ムーコル症（接合菌症）は、稀な疾患であり、実際の検体を得られる機会は少ないことが、理由の一つである。

Strategy for Future Research Activity

新規診断キットのヒト検体を用いた評価を進めるために、共同研究者や血液内科スタッフとも連携を強化し、検体を集めて研究を推進する。

Causes of Carryover

新規診断キットの感度・特異度を高めるための再評価を行ったため、当初より計画が遅れている。さらにムーコル症（接合菌症）は稀な疾患であり、そのヒト検体収集に時間がかかっている。

Expenditure Plan for Carryover Budget

臨床検体を集めて、新規診断キットの評価を行う。感染動物実験も実施する。

Research Products

• [Journal Article] Clinical feature of pulmonary cryptococcosis in non-HIV patients in Japan. (2015)
  • Author(s): Kohno S, Kakeya H, Izumikawa, Miyazaki T, Yamamoto Y, Yanagihara K, Mitsutake K, Miyazaki Y, Maesaki S, Yasuoka A, Tashiro T, Mine M, Uetani M, Ashizawa K.
  • Journal Title: Journal of Infection and Chemotherapy Volume: 21 Pages: 23-30
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Efficacy of combination with oseltamivir phosphate and azithromycin for influenza: a multicenter, open-label, randomized study. (2014)
  • Author(s): Kakeya H, Seki M, Izumikawa K, Kosai K, Morinaga Y, Kurihara S, Nakamura S, Imamura Y, Miyazaki T, Tsukamoto M, Yanagihara K, Tashiro T, Kohno S.
  • Journal Title: PLoS One. Volume: 14 Pages: e91293
  • DOI: 1371/journal.pone.0091293.
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Three Cases of Concurrent Infection With Mycobacterium tuberculosis and Cryptococcus neoformans. (2014)
  • Author(s): Kakeya H, Izumikawa K, Yamada K, Obata Y, Nishino T, Takazono T, Kosai K, Kurihara S, Nakamura S, Imaura Y, Miyazaki T, Tsukamoto M, Yanagihara K, Tashiro T, Kohno S
  • Journal Title: Internal Medicine Volume: 53 Pages: 1685-1692
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Concurrent subcutaneous Candidal abscess and pulmonary Cryptococcosis in patient with diabetes mellitus and a history of corticosteroid therapy. (2014)
  • Author(s): Kakeya H, Izumikawa K, Yamada K, Narita Y, Nishino T, Obata Y, Takazono T, Kuraihara S, Kosai K, Morinaga Y, Nakamura S, Imamura Y, Miyazaki T, Tsukamoto M, Tsukamoto M, Yanagihara K, Takenaka M, Tashiro T, Kohono S.
  • Journal Title: Internal Medicine Volume: 53 Pages: 1385-1390
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant