2014 Fiscal Year Research-status Report
ラブドイド腫瘍における薬剤耐性機序のエピゲノム解析と新規治療法の開発
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25461602
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
桑原 康通 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (30590327)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
細井 創 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20238744)
家原 知子 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (20285266)
土屋 邦彦 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (90381938)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 悪性ラブドイド腫瘍 / アポトーシス / SNF5 / NOXA / Mcl-1 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
【背景】Malignant rhabdoid tumor(以下 MRT)では、ほぼ全例で hSNF5(INI1) の機能喪失が認められている。そのため、MRT の腫瘍原性の解明にはhSNF5の機能解析が重要と考えられている。近年、proapoptotic proteinの1つであるNOXAが、hSNF5 により直接転写活性を受けることが報告された。NOXAは Bcl-2 ファミリーに結合・阻害し、アポトーシスを誘導する。
【目的】hSNF5の機能喪失によるNOXA の発現低下が、MRTにおけるapoptosis 誘導機構に及ぼす影響と薬剤感受性の関係を解析する。
【方法】MRT 細胞株のNOXA の発現を hSNF5 の正常な他の小児固形腫瘍とWester blot法と定量的PCR法で比較した。次に、NOXA安定発現MRT細胞株を樹立し、doxorubicin(DOXR)の感受性とアポトーシス誘導効果をコントロール群と比較した。さらに、MRT細胞株に対してsiRNAによるMcl-1のノックダウンを行い、DOXRの感受性とアポトーシス誘導効果をコントロール群と比較した。MRT細胞株に対するDOXRとBcl-2阻害剤であるTW37の併用効果を検討した。
【結果】MRT細胞株では、他の固形腫瘍の細胞株に比べ NOXAのmRNAとタンパク発現が相関して低下していた。NOXA安定発現群は、DOXRのIC50がコントール群に比べ60%低下し、アポトーシスが誘導された。また、NOXA安定発現群では増殖能が抑制された。Mcl-1ノックダウン群ではDOXRのIC50が90%低下した．この時，アポトーシスが誘導されていることを確認した．DOXRとTW37の併用ではcombination indexが0.9未満となり相乗効果が示された。
【考察と結語】MRT では hSNF5 欠損によってエピジェネティックに NOXA の発現が抑制されている。そのため、MRTではNOXA と Mcl-1 との結合を介したアポトーシスが阻害され、薬剤抵抗性を獲得している。また、NOXAの欠損が腫瘍の増殖能の獲得に関与している可能性も示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
1: Research has progressed more than it was originally planned.
Reason
MRT細胞株では、他の固形腫瘍の細胞株に比べ NOXAのmRNAとタンパク発現が相関して低下していた。NOXA安定発現群は、DOXRのIC50がコントール群に比べ60%低下し、アポトーシスが誘導された。また、NOXA安定発現群では増殖能が抑制された。Mcl-1ノックダウン群ではDOXRのIC50が90%低下した．この時，アポトーシスが誘導されていることを確認した．DOXRとTW37の併用ではcombination indexが0.9未満となり相乗効果が示された。このように、細胞株を用いた実験はほぼ終了している。
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| Strategy for Future Research Activity |
MRT細胞株をマウスに移植し、zenograftモデルを作成。マウスの系でMcl-1ノックダウンの効果やTW-37と化学療法剤の併用効果を確認する実験を行う予定である。
また、当院で経験した症例の腫瘍組織でのNOXAの発現やMcl-1の発現を検討し臨床への橋渡し研究へとつなげる予定である。
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