2015 Fiscal Year Annual Research Report
ラブドイド腫瘍における薬剤耐性機序のエピゲノム解析と新規治療法の開発
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25461602
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
桑原 康通 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (30590327)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
細井 創 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20238744)
家原 知子 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (20285266)
土屋 邦彦 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (90381938)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 悪性ラブドイド腫瘍 / NOXA / 薬剤耐性 / SNF5 / Mcl-1 / アポトーシス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
悪性ラブドイド腫瘍(MRT)は、hSNF5遺伝子の単一変異によって発症する。近年、プロアポトーシスタンパクの1つであるNOXAが、hSNF5 により直接転写活性を受けることが報告された。NOXAは Mcl-1といったBcl-2 ファミリーに結合・阻害しアポトーシスを誘導する。
【目的】hSNF5の機能喪失によるNOXA の発現低下が、MRTでのアポトーシス誘導機構に及ぼす影響と薬剤感受性の関係を解析する。
【方法】MRT 細胞株のNOXA の発現を hSNF5 の正常な他の小児固形腫瘍とWestern blot法と定量的PCR法で比較した。次に、NOXA安定発現MRT細胞株とMRT細胞株に対してMcl-1ノックダウン細胞株を樹立し、doxorubicin(DOXR)の感受性とアポトーシス誘導効果を検討した。MRT細胞株に対するDOXRとBcl-2阻害剤であるTW37の併用効果を検討した。また、免疫不全マウスへのMRT細胞株皮下移植腫瘍での、Mcl-1ノックダウンにおけるDOXRの効果とTW-37併用効果を解析した。
【結果】MRT細胞株では、NOXAのmRNAとタンパク発現が相関し低下していた。NOXA安定発現群、Mcl-1ノックダウン群ともに、DOXRのIC50がコントール群に比べ低下し、アポトーシスが誘導された。強制発現したNOXAはMcl-1と会合していることを免疫沈降法で確認した。DOXRとTW37の併用ではcombination indexが0.9未満となり相乗効果が示された。免疫不全マウスへのMRT細胞株皮下移植系では、Mcl-1ノックダウン細胞株においてDOXR投与群で腫瘍の増大を抑制する効果をみとめ、DOXRとTW37の併用では腫瘍増殖効果を抑制した。
【考察と結語】MRT では hSNF5 欠損によるエピジェネティックな NOXA の発現抑制により、NOXA と Mcl-1 との結合を介したアポトーシスが阻害され、NOXA依存性にMcl-1機能抑制が障害されているため化学療法抵抗性を獲得していることを明らかにし，Mcl-1はMRT治療における分子標的となり得ることを示した。
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