2014 Fiscal Year Research-status Report
機能獲得変異型NPR-Bを応用した心不全治療戦略の確立
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25461620
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
岡田 陽子 大阪大学, 医学部附属病院, 医員 (30457022)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小垣 滋豊 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (00311754)
高橋 邦彦 大阪大学, 医学系研究科, 助教 (10610230)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | NPR-B / CNP / cyclic GMP / 心不全 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
《in vitro》新生児ラットより抽出した初代培養心筋細胞に対し、アデノウイルスベクターを用いて機能獲得変異型NPR－Bを発現させたところ、既知の心筋肥大化シグナルであるアンギオテンシンⅡ、エンドセリンⅠ、イソプロテレノールによる心筋細胞肥大を、有意に抑制することを確認した（細胞サイズ、ANP・BNP・βMHCの発現）。また、機能獲得変異型NPR－Bを心線維芽細胞に発現させたところ、既知の心線維化シグナルであるTGFβによる線維化も有意に抑制することを確認した（Collagen－1の発現）。さらに、機能獲得変異型NPR－Bを発現させた心筋細胞・心線維芽細胞では、NPR－BのリガンドであるCNP非存在化においても、細胞内cGMP濃度が数百～数千倍に上昇することが確認できた。これは、薬剤として使用されているSildenafilやCNPによる細胞内cGMP濃度の上昇が数倍～数十倍程度であることを考慮すると、非常に高い濃度であると言える。さらに、機能獲得変異型NPR－Bは、Sildenafilと同程度の心筋肥大抑制効果を示した。一方で、細胞毒性やapotosisの亢進などは認めなかった。
《in vivo》アデノ随伴ウイルスベクター（type9、以下AAV－9ベクター）を日本医科大学（島田教授、三宅先生）より提供いただき、GFP（control）、野生型NPR－B、機能獲得変異型NPR－BそれぞれのAAV－9ベクターを作製した。10週齢のオスのマウスの頸部に、皮下埋め込み型浸透圧ポンプを埋め込み、イソプロテレノール30mg/kg/dayを1週間持続投与することにより、心筋肥大モデルマウスの作製に成功した。さらに、この心筋肥大モデルマウスにおいて、心臓の繊維化も確認した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
in vitroの研究に関しては、すでに論文を作成中である。
in vivoに関しても、AAV－9ベクターの作製には成功しており、今後心不全モデルマウスへの投与を行なっていく予定である。マウスへのウイルスベクターの投与方法（尾静脈静注）や、心肥大・心線維化の評価方法である心カテーテル手技や心エコー手技についても既に習得している。
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| Strategy for Future Research Activity |
10週齢のオスのマウスにAAV－9ベクターを経静脈的に投与し、一週間飼育することで、心筋細胞にGFP-control、野生型NPR-B、変異型NPR-Bをそれぞれ発現させる。12週齢の時点で心不全モデル群（イソプロテレノール持続投与群）、コントロール群（生理食塩水持続投与群）に分け、それぞれイソプロテレノール（30mg/kg/day）、生理食塩水を7日間持続投与する。13週齢でカテーテルによる血行動態評価（左右心房・心室圧、圧波形など）や、心筋肥大の程度、心線維化の程度、TUNEL染色によるApotosisの評価などの組織学的検討により、心不全に対する影響を検討する。また並行して既存の薬剤(sildenafil,CNP)を12週齢から1週間投与した群との比較も行う。
さらに、10週齢のオスのマウスに、それぞれイソプロテレノール、生理食塩水を投与し、心不全モデル群、コントロール群に分ける。11週齢の時点で、それぞれの群にAAV－9ベクターを用いて変異型NPR-Bを発現させ、13週齢の時点での評価により、心不全に対する治療効果を検討する。
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Research Products
(1 results)
