2014 Fiscal Year Research-status Report
肺高血圧症における内皮由来過分極因子の役割解明と治療応用
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25461621
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
早渕 康信 徳島大学, ヘルスバイオサイエンス研究部, 准教授 (20403686)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
阪田 美穂 徳島大学, 大学病院, 特任助教 (80532514)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 肺高血圧症 / 肺動脈 / 血管内皮由来過分極因子 / チャネル / カリウムチャネル / 血管 / 内皮細胞 / 平滑筋細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
小児においては特発性および先天性心疾患や呼吸器疾患に伴い肺動脈性肺高血圧の病態を呈する。肺高血圧の病態進行とともに病理学的には血管内膜の肥厚線維化・中膜の平滑筋層肥大・叢状病変と呼ばれる複雑な像を呈する病変が認められ、心不全の増悪を引き起こし、患児の予後に大きく影響を及ぼすこととなる。
我々は本研究において肺動脈性肺高血圧症の血管病変における血管内皮由来過分極因子（Endothelium-derived hyperpolarizing factor, EDHF)の作用状態、およびEDHFの肺高血圧病変進行における役割解明と肺高血圧症への治療応用の開発に関して研究することを目的として、おもに血管内皮細胞および血管平滑筋細胞のカリウムチャネル制御の点から検討していくこととした。
コントロール（正常肺動脈圧）ラットおよび肺高血圧ラットにおける肺動脈のEDHF産生・遊離およびEDHFに対する血管平滑筋細胞の反応の検討を研究した。
モノクロタリン投与または低酸素暴露によって肺高血圧を呈したラットの肺血管組織を摘出し、血管張力測定を施行して、内皮依存性弛緩およびEDHF依存性弛緩について観察した。EDHF依存性弛緩の検討では、プロスタグランジンや一酸化窒素の影響を取り除くために、PGI2阻害剤、NO産生阻害剤、グアニル酸サイクラーゼ阻害剤などを適宜使用して施行した。
肺高血圧ラットにおいては内皮依存性の血管弛緩反応低下が認められ、肺血管のEDHFに対する反応を検討したところ反応性の低下が認められた。各々のラット群において、血管内皮細胞のKCa3.1, KCa2.3 channel、血管平滑筋細胞のKCa1.1 channelの発現量をWestern blot, 免疫組織染色および電気生理学的手法を用いて検討する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究において、正常肺動脈圧であるコントロールラットおよび疾患モデルとした肺高血圧ラット、各々における肺動脈の血管内皮由来過分極因子（EDHF)産生・遊離およびEDHFに対する血管平滑筋細胞の反応の検討を行った。肺高血圧ラットにおいては内皮依存性の血管弛緩反応低下が認められ、肺血管のEDHFに対する反応を検討したところ反応性の低下が認められた。
さらに、各々のラット群において、Vascular endothelial KCa3.1, KCa2.3 channel、vascular smooth muscle cell KCa1.1 channelの発現量をWestern blot, 免疫組織染色および電気生理学的手法を用いて検討することを進めており、おおむね順調に進展しているものと考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
正常肺動脈圧であるコントロールラットおよび肺高血圧ラットにおける endothelial cell KCa3.1, KCa2.3 channel、Smooth muscle cell KCa1.1 channelの発現量をWestern blot, 免疫組織染色および電気生理学的手法を用いて検討している。さらに、多方向からの解析として、電気生理学的検討には、摘出した組織において多光子共焦点レーザー顕微鏡を用いた細胞膜電位測定を施行することに加えて、血管内皮細胞および平滑筋細胞を各々単離して、Patch Clamp法を用いたChannel電流の測定、膜電位測定（Whole-cell configuration, Cell-attached configuration)を計画している。
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